モデルがん細胞株を用いたチロシンキナーゼSrcの標的因子の同定

使用模型癌细胞系鉴定酪氨酸激酶 Src 的靶因子

• 批准号: 12215101
• 负责人: 佐藤 賢一
• 金额: $ 1.98万
• 依托单位: Kobe University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12215101/
• 关键词: 細胞がん化; がん遺伝子; 蛋白質チロシンリン酸化; シグナル伝達; A431細胞; Src; Stat; ホスホリパーゼC-gamma

本研究で私たちは「細胞膜受容体刺激に伴うチロシンキナーゼSrcの活性化にアダプター分子Shcが関与する」との仮説を立て、2つのモデル実験系〜がん細胞A431(上皮成長因子による受容体刺激)及びツメガエル卵(受精による受容体刺激)〜を用いて以下の3項目を明らかにした。1.ShcとSrcの相互作用とSrc活性化の相関。2.Shc-Src相互作用を伴う細胞応答。3.変異型ShcによるSrc活性化/細胞応答の阻止。さらに私たちは活性化Srcの標的因子として、がん細胞A431では転写因子Statを、ツメガエル卵では脂質分解酵素ホスホリパーゼC-gammaを同定した。前者は細胞増殖停止に、後者はカルシウム動員/卵活性化に働く分子である。以上の結果は、発がん/がん形質維持に働く2つの原がん遺伝子産物Src/Shcの相互作用が、細胞死や発生開始という細胞がん化の対局にある現象にも関わることを示している。インビボでのShcとSrcの相互作用の証明やとSrc活性化との関連づけが年度はじめに行えたことで、主要な課題であった標的因子同定の作業に多くの時間を費やすことが出来た。最終的には特定のShc分子種のみがSrc活性化やその標的分子のリン酸化に効果を持つことを示すことができそうで、同時並行で行っているShc-Src相互作用/Src活性化の試験管内再構成実験の結果と共に、2001年中に論文発表を行う予定である。受精/発生開始を待つ卵という、がん細胞と対局にある実験系でSrc型チロシンキナーゼの生理機能を解析していくことは、Srcがそのおかれた細胞環境に応じて、多面的な機能を発揮しうることを示していくことにつながる。またある意味で、発生開始とがん化や細胞死といった一見大いに相反するように見える生命現象が、実は極限られた細胞内シグナル分子の微妙な挙動の違いに由来するものであることを見ていくことになるかも知れない。

在这项研究中，我们假设“由于细胞膜受体刺激，辅助分子SHC参与酪氨酸激酶SRC的激活”，并使用两个模型实验系统揭示了以下三个项目：癌细胞A431（表皮生长因子受体刺激）和Xenopus蛋（受体刺激）。 1。SHC与SRC相互作用与SRC激活之间的相关性。 2。与SHC-SRC相互作用的细胞反应。 3。突变体SHC抑制SRC激活/细胞反应。此外，我们确定了癌细胞A431中的转录因子Stat和异爪蟾卵中的脂质降解酶C-gamma是活化的SRC的靶标。前者是作用于细胞生长停滞的分子，后者是作用于钙募集/卵子激活的分子。以上结果表明，在维持癌变/癌症特征方面作用于两个原始癌基因产物SRC/SHC之间的相互作用也参与了细胞癌发生的现象，例如细胞死亡和发育发育。 SHC和SRC相互作用在体内证明了SHC和SRC相互作用，并将SRC激活与SRC激活联系起来，能够花费大量时间来识别目标因素的任务，这是一个重大挑战。最终，似乎只有特定的SHC分子物种可以被证明在其靶分子的SRC激活和磷酸化中有效，并且该论文计划在2001年发表，以及同时在SHC-SRC相互作用/SRC激活中同时进行的体外重建实验的结果。分析SRC型酪氨酸激酶在针对癌细胞（称为卵子）的实验系统中的生理功能，该系统等待受精/发育的发作，将表明SRC可以根据其所在的细胞环境发挥多种功能。从某种意义上说，我们可能会看到看似相反的生命现象，例如发育，癌症和细胞死亡的发作，实际上是源于细胞内信号分子行为的细微差异。

项目成果

Sato,K.-I.: "Adaptor protein Shc undergoes translocation and mediates up-regulation of the tyrosine kinase c-Src in EGF-stimulated A431 cells."Genes Cells. 5. 749-764 (2000)

Sato,K.-I.：“在 EGF 刺激的 A431 细胞中，接头蛋白 Shc 发生易位并介导酪氨酸激酶 c-Src 的上调。”Genes Cells。

Sato,K.-I.: "Hydrogen peroxide induces Src family tyrosine kinase-dependent activation of Xenopus eggs."Dev.Growth Differ.. 43. 55-72 (2001)

Sato,K.-I.：“过氧化氢诱导爪蟾卵的 Src 家族酪氨酸激酶依赖性激活。”Dev.Growth Differ.. 43. 55-72 (2001)

Tokmakov,A.A.: "Calcium oscillations in Xenopus egg cycling extracts."J.Cell.Biochem.. (印刷中).

Tokmakov, A.A.：“非洲爪蟾卵循环提取物中的钙振荡。”J.Cell.Biochem..（正在出版）。

Sato,K.-I.: "Fertilization signalling and protein-tyrosine kinases."Comp.Biochem.Physiol.B Biochem.Mol.Biol.. 126. 129-148 (2000)

Sato,K.-I.：“受精信号传导和蛋白酪氨酸激酶。”Comp.Biochem.Physiol.B Biochem.Mol.Biol.. 126. 129-148 (2000)