受精胚における細胞分裂装置の活性化と発生分化プログラム駆動の分子メカニズム

驱动受精胚胎细胞分裂机制激活和发育分化程序的分子机制

基本信息

批准号：
16026224
负责人：
佐藤賢一
金额：
$ 2.37万
依托单位：
Kobe University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2004
资助国家：
日本
起止时间：
2004 至 2005
项目状态：
已结题

项目摘要

アフリカツメガエル(以下、ゼノパス)およびマウスの卵細胞をモデル実験系として、受精に伴う発生プログラムの活性化に関わる分子メカニズムの解析を行い、以下の知見を得た。ゼノパスにおいては、卵細胞膜マイクロドメイン(以下、卵ラフト)の構造と機能について解析を行い、単一細胞膜貫通型蛋白質uroplakin III(以下、UPIII)が、その細胞外ドメインによって、精子との相互作用(接着あるいは融合、あるいはその両方)、そして、細胞内ドメインが受精成立の卵細胞内シグナル伝達に、それぞれ関与する可能性を示唆する結果を得た。UPIII細胞外ドメインの具体的な機能については、精子に由来するプロテアーゼ活性によって部分的に切断されること、この切断反応を阻害する薬剤が受精阻害を引き起こすこと、といった、受精成立に必要な精子プロテアーゼ活性の卵細胞膜ターゲットとしての理解が深まった。細胞内ドメインの機能については、前年度までに既に明らかにしていたチロシンキナーゼSrcによる受精依存的なリン酸化に加え、テトラスパニン型相互作用因子であるuroplakin Ib(以下、UPIb)との協調作用によるシグナル伝達への関与が示された。すなわち、UPIIIはUPIbと共に発現されることで複合体を形成することによって、卵細胞膜および卵ラフトへの局在が可能になること、そして、UPIII/UPIb複合体はチロシンキナーゼSrcの不活性化を誘導すること、等が明らかになった。これらの結果を総合すると、ゼノパス卵の受精時に精子がプロテアーゼ活性により卵ラフトのUPIII/UPIb複合体に相互作用し、UPIIIの部分的な切断が何らかのメカニズムによって細胞内のチロシンキナーゼSrcの活性化に翻訳され、チロシンリン酸化のシグナル伝達が点火され、カルシウム経路の活性化へ導かれていく、という流れが想定される。マウスにおいては、精子に特異的に発現するリン脂質分解酵素phospholipase Cζの、受精に伴うカルシウムオシレーションという現象への関与について、特異的抗体や変異蛋白質の作成により解析した。その結果、phospholipase Cζが、受精時に卵細胞内へ導入される可能性が高いことや、もともと単一ポリペプチドである本分子の部分的な切断と断片化されたフラグメントが再会合が活性調節に関わる可能性等が示された。

我们将Xenopus（以下称为Xenopus）和小鼠蛋细胞作为模型实验，我们分析了与受精有关的发育程序激活所涉及的分子机制，并获得了以下发现。在武士病中，分析了卵膜微域（以下称为卵筏）的结构和功能，结果表明，与卵形和/或依次的soff forsing comportiation contection和Intrimal informiralder cormertife cross forsing cossed（upiii iii）可能涉及单个跨膜蛋白乌罗皮氏蛋白III（以下称为UPIII）（粘附和/或融合）。 UPIII细胞外结构域的特定功能已成为对受精所需的精子蛋白酶活性的更深入的了解，例如被从精子中得出的蛋白酶活性部分裂解，以及抑制这种裂解反应的药物会导致受精抑制。细胞内结构域的功能被证明通过与营养四跨撒素蛋白型相互作用因子Uroplakin IB（以下称为UPIB）合作，除了酪氨酸Kinase SRC依赖于受精的磷酸化外，还已经揭示了以前的一年。也就是说，已经揭示了UPIII与UPIB一起表达以形成复合物，可以定位到卵细胞膜和卵筏上，并且UPIII/UPIB复合物诱导酪氨酸激酶SRC失活。 Taken together these results, it is assumed that during fertilization of Xenopus eggs, sperm interacts with the UPIII/UPIb complex of egg raft through protease activity, and partial cleavage of UPIII is translated by some mechanism into activation of the intracellular tyrosine kinase Src, signaling of tyrosine phosphorylation is ignited, leading to activation of the calcium pathway.在小鼠中，通过特异性抗体和突变蛋白的创建，通过分析了与受精相关的钙振荡现象中特异性表达的磷脂降解酶Cζ的参与。结果，结果表明，受精后很可能将磷脂酶Cζ引入卵细胞，并且该分子的部分裂解和碎片片段最初是一种多肽，可能参与活性调节。

项目成果

期刊论文数量（26）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Generation of an antibody specific to Xenopus fertilized eggs by subtractive immunization

DOI：
10.1111/j.1365-2443.2005.00838.x
发表时间：
2005-04-01
期刊：
GENES TO CELLS
影响因子：
2.1
作者：
Sakakibara, K;Sato, K;Fukami, Y
通讯作者：
Fukami, Y

Activation of Arabidopsis MAPK kinase kinase (AtMEKK1) and induction of AtMEKK1-AtMEK1 pathway by wounding

DOI：
10.1007/s00425-005-0126-7
发表时间：
2006-03-01
期刊：
PLANTA
影响因子：
4.3
作者：
Hadiarto, T;Nanmori, T;Yasuda, T
通讯作者：
Yasuda, T

Molecular identification and characterization of Xenopus egg uroplakin III, a raft-associated protein that is tyrosine-phosphorylated upon egg fertilization

非洲爪蟾卵尿斑蛋白 III 的分子鉴定和表征，这是一种卵子受精时酪氨酸磷酸化的筏相关蛋白

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
J.Biol.Chem. (In press)
影响因子：
0
作者：
Miyazaki;T.;Takahashi K;Fukuhara A;Hamazaki T;Tomoda K;Murakami M;Sato K.et al.;Tokmakov A.A.et al.;Sakakibara K.et al.;Sakakibara K.et al.
通讯作者：
Sakakibara K.et al.

Association of c-Sic with pS2Shc in mitotic NIH3T3 cells as revealed by Src-Shc binding site-specific antibodies

Src-Shc 结合位点特异性抗体揭示了有丝分裂 NIH3T3 细胞中 c-Sic 与 pS2Shc 的关联

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Journal of Biochemistry 137
影响因子：
0
作者：
Sawa;C.;et al.;Sakakibara et al.;Sato et al.
通讯作者：
Sato et al.

Uroplakin III, a novel Sic substrate in Xenopus egg rafts, is a target for sperm protease essential for fertilization

Uroplakin III 是非洲爪蟾卵筏中的一种新型 Sic 底物，是受精所必需的精子蛋白酶的靶标

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
Developmental Biology 286
影响因子：
0
作者：
Tomisato;W;Heike Laman;Kayoko Maehara;Sakakibara et al.;Hirose E. et al.;Sato et al.;Bravou V. et al.;Tokmakov et al.;Karakaidos P. et al.;Xouri G. et al.;Sakakibara et al.;Nishitani H. et al.;Sugimoto N. et al.;Kurokawa et al.;Mahbub Hasan et al.
通讯作者：
Mahbub Hasan et al.

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通讯作者：
大神健博・上野智代・岩尾康宏