モデル生物を用いた癌抑制遺伝子産物PTENの機能解析

使用模型生物体对抑癌基因产物 PTEN 进行功能分析

基本信息

批准号：
12213037
负责人：
前田達哉
金额：
$ 2.37万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12213037/
关键词：
癌抑制遺伝子 PTEN 酵母 TEP1 SIR4

项目摘要

1.TEP1ノックアウト変異株の表現型の検討TEP1ノックアウト変異株を作製し、その表現型を詳細に検討した。種々の生育条件や、ストレスや薬剤に対する感受性等、調べた全ての条件において、ノックアウト変異株に顕著な表現型を見出すことはできなかった。2.TEP1と遺伝的相互作用を示す因子の検索TEP1ノックアウト変異株が顕著な表現型を示さなかったことから、Tep1pと協調的に働いてその機能を代替し得る因子が存在することを想定し、TEP1ノックアウト変異と組み合わせることで致死となるような変異を検索した(合成致死スクリーニング)。また、これとは逆にTep1pが増殖に抑制的に作用することも想定し、Tep1pを過剰発現した場合にのみ致死的となるような変異としてTep1pと拮抗的に働く因子の検索も併せて行った。しかしながら、いずれにおいても十分な規模のスクリーニングを行ったにも関わらず求める変異を得ることはできなかった。1、2の結果は、Tep1pが単独もしくは他の因子と協調して生育に必須な機能を担っているのではないことを強く示唆している。3.Tep1pの細胞内局在の検討Tep1pと蛍光タンパク質GFPとの融合タンパク質を用いて、Tep1pが核と細胞質に分布することを明らかにした。このことは、Tep1pが細胞膜においてPI3ホスファターゼとして機能する以外の働きを、核または細胞質で果たし得ることを示唆していると考えられる。4.Tep1pと相互作用する因子の検索two-hybrid法を用いてTep1pと相互作用する因子を検索したところ、クロマチンのサイレンシングに関わる制御因子Sir4pが同定された。また、Tep1pとSir4pがお互いのC末端領域で相互作用し得ることを示した。このことから、Tep1pが核内でクロマチン構造の制御に関わる可能性も考えられる。

1.TEP1敲除突变株的表型检查我们创建了TEP1敲除突变株并详细检查了其表型。在所有研究条件下，包括各种生长条件以及对应激和药物的敏感性，敲除突变体均未发现显着的表型。 2.寻找与TEP1基因相互作用的因子由于TEP1敲除突变株没有表现出任何显着的表型，我们假设有一个因子可以与Tep1p协同作用并取代其功能，我们寻找当TEP1p发生时致死的突变。结合 TEP1 敲除突变（综合致死筛选）。此外，假设Tep1p以抑制增殖的方式发挥作用，我们还寻找了与Tep1p拮抗的因子，作为仅当Tep1p过度表达时才致命的突变。然而，在所有情况下，尽管进行了足够规模的筛选，但仍无法获得所需的突变。结果 1 和 2 强烈表明，Tep1p 单独或与其他因素协同作用并不对生长发挥重要功能。 3. Tep1p 细胞内定位的检查利用 Tep1p 与荧光蛋白 GFP 的融合蛋白，我们发现 Tep1p 分布在细胞核和细胞质中。这似乎表明 Tep1p 可以在细胞核或细胞质的细胞膜中发挥除 PI3 磷酸酶以外的功能。 4. 寻找与 Tep1p 相互作用的因子当我们使用双杂交方法搜索与 Tep1p 相互作用的因子时，我们发现了 Sir4p，一种参与染色质沉默的调节因子。我们还表明 Tep1p 和 Sir4p 可以在其 C 末端区域相互作用。这表明 Tep1p 可能参与调节细胞核内的染色质结构。