活性酸素DNA損傷修復酵素欠損の分子病態

活性氧DNA损伤修复酶缺乏的分子病理学

基本信息

批准号：
12213013
负责人：
山本和生
金额：
$ 2.56万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

酵母mutT funactional homologをクローニングするために、mutT欠損大腸菌のミューテーター活性を相補する酵母遺伝子をgenomic libraryから検索した。その結果1つのクローンが得られ、塩基配列を求めたところ、脱ユビキチンに関わる遺伝子であることが明らかとなった。この遺伝子のアミノ酸配列中には非常に弱いながらmutT-box様の配列が認められた。MutT欠損大腸菌は、mutT^+株に比べて約100倍高い自然突然変異となるが、酵母の遺伝子を持つmutT欠損株では約10倍となり、1/10に低下した。この遺伝子を破壊した酵母株は野生株に比べて2.5〜6倍高い変異率となった。突然変異体の塩基配列変化を求めたところ、A:T→C:G transversionのみが有意に増加していた(P<0.05)。A:T→C:G transversion変異は大腸菌mutT欠損に特徴的な塩基置換突然変異である。以上の結果は、この遺伝子が、mutT-functional homologであることを強く示唆している。一方、遺伝子破壊株で観察される突然変異の増加は、大腸菌mutT欠損株で観察されるほどには高くはならなかった。このことは、今回クローニングした遺伝子以外にもmutTを相補する遺伝子があるのかもしれない。大腸菌のmutT欠損を相補するものとしてクローニングしてきた経緯から、脱ユビキチンの作用は今回の観察には関わらないと考えられる。

为了克隆酵母 mutT 功能同源物，我们在基因组文库中搜索了补充 mutT 缺陷型大肠杆菌突变活性的酵母基因。结果获得了一个克隆，核苷酸序列表明它是一个参与去泛素化的基因。在该基因的氨基酸序列中观察到类似mutT-box的序列，尽管它非常弱。 MutT 缺陷型大肠杆菌的自发突变率比 mutT^+ 菌株高约 100 倍，但携带酵母基因的 mutT 缺陷型菌株的自发突变率比 mutT^+ 菌株高约 10 倍。 mutT^+ 菌株的比例，减少到 1/10。该基因被破坏的酵母菌株的突变率比野生型菌株高2.5至6倍。当确定突变体的碱基序列变化时，只有A:T→C:G颠换显着增加（P<0.05）。 A:T→C:G颠换突变是大肠杆菌mutT缺陷的碱基取代突变特征。上述结果强烈表明该基因是具有mutT功能的同源基因。另一方面，在基因破坏菌株中观察到的突变增加不如在大肠杆菌 mutT 缺陷菌株中观察到的那么高。这表明除了本次克隆的基因之外，可能还存在与mutT互补的基因。由于它是作为大肠杆菌 mutT 缺陷的补充而被克隆的，因此认为去泛素化的效果与目前的观察结果无关。