活性酸素DNA損傷修復酵素欠損の病態

活性氧DNA损伤修复酶缺乏症的病理学

基本信息

批准号：
13214011
负责人：
山本和生
金额：
$ 2.05万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

活性酸素性DNA損傷7,8-dihydro-8-oxoguanine(8-oxoG)による突然変異生成について、次の4点を明らかにした。1)8-oxoGに起因する変異が特定の塩基配列に局在するかどうかを調べるために、8-oxoG修復欠損株(mutM mutY欠損株)で生じた変異体の配列を解析した結果、特定の4箇所に変異が局在した。この部位では、PuGpu配列中央のGがホットスポットになっていた。そこで、変異はプリン基に囲まれたグアニンで生じやすいという仮説を提案した。2)この仮説の真偽を明らかにするために、ホットスポット配列AGAに注目した。この配列の3'側の塩基をT、G、Cに変化させたAGA、AGT、AGG、AGC配列を作り、変異率を調べたところ、3'側の塩基がプリン基の時はピリミジン基の時よりも変異が生じやすいこと即ち、前後の塩基配列に影響されることが分かった。3)変異生成が前後の塩基配列に影響される原因として、ポリメラーゼの忠実度が塩基配列に影響される可能性を検証した。8-oxoGを持つ4つの配列を人工合成し、それを鋳型とした突然変異を調べたところ、3'側の塩基がA、T、G、Cの時に各々13.8%、13.1%、16.1%、11.9%であった。つまりDNAポリメラーゼが8-oxoGをバイパス合成する時、周辺配列はその忠実度に影響しないことが分かった。4)8-oxoG修復酵素の活性と周辺配列について調べた。8-oxoGの3'側の塩基がA、T、G、Cの時、Fp9/MutMは各々22.9%、23.2%、24.7%、94%の割合で切断し、MutYは各々0.03%、5.82%、1.89%、2.53%の割合で切断した。Fpg/MutMは3'側の塩基がシトシンの時は活性が低いこと、MutYは3'側の塩基が,アデニンの時は活性が低いことが分かった。

关于由活性氧DNA损伤引起的诱变7,8-二氢-8-氧甲烷（8-oxog），阐明了以下四个点。 1）为了研究由8-oxog引起的突变是否定位于特定的碱基序列，我们分析了发生在8-oxog修复缺陷菌株（MUTM Muty缺陷型菌株）中的突变体的序列，并发现突变定位于四个特定位置。在此站点，pugpu序列中心的G成为热点。因此，我们提出了一个假设，即突变可能发生在被嘌呤基团包围的鸟嘌呤中。 2）为了阐明这一假设的真实性，我们专注于热点序列AGA。当我们创建AGA，AGT，AG和AGC序列时，该序列3'一侧的基础更改为T，G和C，并检查了突变速率时，我们发现，当3'侧的基础上的基础是嘌呤组时，突变的可能性比3'侧的基础更可能受到吡中亚胺群的影响，而它的基础序列是在基础序列的。 3）我们研究了聚合酶的忠诚度受基本序列的影响，因为诱变的原因是在之前和之后受到基础序列的影响。人工合成了四个携带8-oxog的序列，并检查了使用它们作为模板的突变。当使用A，T，G和C时，3'侧基础分别为13.8％，13.1％，16.1％和11.9％。换句话说，发现当DNA聚合酶绕过8-oxog的合成时，周围的序列对它们的保真度没有影响。 4）研究了8-oxog修复酶的活性和周围序列。当8-oxog的3'侧的基础为a，t，g和c时，将FP9/mtm裂解为22.9％，23.2％，24.7％和94％，分别以0.03％，5.82％，1.89％和2.53％的分别分解Muty。发现当3'碱为胞嘧啶时，FPG/MUTM的活性较低，而在3'碱为腺嘌呤时，MUTY的活性较低。