核内オーファンプロテインネットワークの解明

核孤儿蛋白网络的阐明

• 批准号: 12206065
• 负责人: 五十嵐 和彦
• 金额: --
• 依托单位: Hiroshima University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12206065/
• 关键词: オーファンプロテイン; 細胞内分布; 核構造; 機能部位; ネットワーク

ゲノムプロジェクトは、数多くの機能未知の蛋白質(オーファンプロテイン)の存在を明らかにしつつある。一方、核では複製、修復、転写などの素反応が特定の部位で生じることも明らかになりつつある。そこで本研究では、核内で特徴的な分布を示すオーファンプロテインに着目し、その分布と核内反応部位との関連、そして結合因子を同定することにより、核における新しい蛋白質ネットワークを同定することを目指した。1.核内の機能部位とオーファンプロテインの相互関係を明らかにするために、修復部位をRad51抗体染色、DNA複製部位をCy3-dUTPパルス標識、RNA合成部位をBrUTPパルス標識で同時に検出するシステムを構築した。このシステムをオーファンプロテイン-EGFP融合因子発現細胞に用いることにより、核内素反応とオーファンプロテインの局在との関連を検討できるものと期待できる。2.いくつかのBTB/POZ因子に関してEGFP融合蛋白質を発現させ、そのドットと機能部位の関連を検討した。その結果、うち一つに関しては転写部位と一致する分布を示すことが明らかになった。

基因组计划揭示了许多功能未知的蛋白质（孤儿蛋白质）的存在。另一方面，越来越清楚的是，复制、修复和转录等基本反应发生在细胞核的特定位点。因此，在这项研究中，我们重点关注在细胞核中表现出特征分布的孤儿蛋白，并通过确定其分布与核反应位点之间的关系以及我所针对的结合因子来鉴定细胞核中的新蛋白质网络。 1. 为了阐明细胞核中功能位点和孤儿蛋白之间的相互关系，我们建立了一个系统，该系统可以同时检测Rad51抗体染色的修复位点、Cy3-dUTP脉冲标记的DNA复制位点和BrUTP脉冲标记的RNA合成位点。建造的。通过在表达孤儿蛋白-EGFP融合因子的细胞中使用该系统，预计我们将能够研究核反应与孤儿蛋白定位之间的关系。 2.我们表达了几种BTB/POZ因子的EGFP融合蛋白，并研究了点与功能位点之间的关系。结果表明，其中一个显示出与转录位点一致的分布。

项目成果

Suzuki-Ishigaki,S.: "The mouse L-histidine decarboxylase gene : structure and transcriptional regulation by CpG methylation in the promoter region."Nucleic Acids Res.. 28. 2627-2633 (2000)

Suzuki-Ishigaki,S.：“小鼠 L-组氨酸脱羧酶基因：启动子区域 CpG 甲基化的结构和转录调节。”核酸研究 28. 2627-2633 (2000)

Hoshino,H.: "Oxidative stress abolishes leptomycin B-sensitive nuclear export of transcription repressor Bach2 that counteracts activation of Maf recognition element."J.Biol.Chem.. 275. 15370-15376 (2000)

Hoshino, H.：“氧化应激消除了转录抑制因子 Bach2 的瘦霉素 B 敏感核输出，从而抵消了 Maf 识别元件的激活。”J.Biol.Chem.. 275. 15370-15376 (2000)

Kanezaki,R.: "Transcription factor BACH1 is recruited to the nucleus by its novel alternative spliced isoform."J.Biol.Chem.. 276. 7278-7284 (2001)

Kanezaki, R.：“转录因子 BACH1 通过其新颖的选择性剪接亚型被招募到细胞核。”J.Biol.Chem.. 276. 7278-7284 (2001)

Yoshimura,S.H.: "Atomic force microscopy proposes a 'kiss and pull' mechanism for enhancer function."J.Electron Microscopy. 49. 407-413 (2000)

Yoshimura,S.H.：“原子力显微镜提出了增强子功能的‘亲吻和拉动’机制。”J.Electron Microscopy。

Sasaki,S.: "Cloning and expression of human B cell-specific transcription factor BACH2, mapped to chromosome 6q15."Oncogene. 19. 3739-3749 (2000)

Sasaki,S.：“人类 B 细胞特异性转录因子 BACH2 的克隆和表达，映射到染色体 6q15。”癌基因。