ホヤ精巣cDNAの網羅的解析による軸糸構築の分子的基盤の確立

通过综合分析海鞘睾丸cDNA建立轴丝组装的分子基础

基本信息

批准号：
12202008
负责人：
稲葉一男
金额：
--
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (C)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12202008/
关键词：
ホヤ精巣精子鞭毛軸糸 cDNA EST解析プロテオーム受精ダイニン

项目摘要

真核生物の鞭毛繊毛は、細胞運動器官及び細胞外情報の物理的・化学的受容器として重要な役割を果たしている。本研究では、発生や形態形成においてもその重要性が指摘されている軸糸を構成する全蛋白質の記述と、cDNA情報、蛋白質一次構造情報、二次元電気泳動スポットの特定化、軸糸内局在情報を全て網羅したデータベースの作製を目指して行った。脊索動物カタユウレイボヤの精巣cDNAの網羅的解析(EST解析;citsプロジェクト)と、精子鞭毛の軸糸蛋白質に対する抗血清を用いた軸糸cDNAのスクリーニング(CiAxプロジェクト)という2つの方法により研究を進めた。citsプロジェクトに関しては、京都大学佐藤研究室、遺伝研シーケンスセンターの協力を得て、本年度7220個の5′-EST、4927個の3′-ESTを得た。3′-クラスタリングにより得られたクラスターのうち、約半数は精巣特異的であった。5′-ESTのBLAST検索により、既知蛋白質と有為な相同性を示したcDNAの中で、特にユビキチン系、小胞輸送系、免疫/血液凝固系に関与する蛋白質が多いことが分かった。これらは精子先体形成、先体反応、精子一卵相互作用に関与していると予想される。一方、CiAxプロジェクトで現在までに78クローン得られているが、これらの中にはHSP40やB7など軸糸蛋白質としては未同定のもの、さらにはヒト、ショウジョウバエ、線虫などで記載されていながら機能が未知の蛋白質が多く見い出された。以上のcDNA情報と蛋白質の生理機能を有機的にリンクさせる試みの一つとして、精子活性化に伴い変化する蛋白質を二次元電気泳動により調べた結果、等電点が変化する16種の蛋白質を同定し、そのうち2種類はcitsプロジェクトで得られたクローンに由来することが明かとなった。

真核鞭毛纤毛作为细胞运动器官和细胞外信息的物理和化学受体起重要作用。在这项研究中，我们旨在创建一个涵盖构成轴向线的所有蛋白质的数据库，这些蛋白质在发育和形态发生中非常重要，以及cDNA信息，主要蛋白质结构信息，识别二维电泳斑点以及疗法内螺纹螺纹的定位信息。这项研究是使用两种方法进行的：对Chordate Roe Leiboya的睾丸cDNA（EST分析； CITS项目）进行了详尽的分析，并使用抗血清对精子鞭毛的轴向蛋白（CIAX Project）筛选轴向cDNA。在京都大学SATO实验室和遗传研究所序列中心的合作中，我们今年获得了7,220个5'-EST和4,927 3'-EST。在通过3群聚类获得的簇中，大约一半是睾丸特异性的。爆炸搜索5'最佳表明，在与已知蛋白质具有重要同源性的cDNA中，泛素系统，囊泡转运系统和免疫/血液凝结系统中尤其涉及许多蛋白质。这些预计将参与精子科学体的形成，高级反应和精子相同的卵相互作用。同时，迄今通过CIAX项目获得了78个克隆，其中许多克隆被认为未鉴定为轴向纱线蛋白，例如HSP40和B7，以及许多在人类，果蝇和nematodes中所描述的具有未知功能的蛋白质。作为一种尝试将上述cDNA信息与蛋白质的生理功能有机地联系起来的尝试之一，我们研究了通过二维电泳随着精子激活而变化的蛋白质，发现16种具有等电点变化的蛋白质被鉴定出来，其中两个是从cits投影中从clone中获得的两个蛋白。