ストローマ依存性の多能性幹細胞株の自己複製機構の解析

基质依赖性多能干细胞系自我更新机制分析

• 批准号: 10181210
• 负责人: 伊藤 克彦
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10181210/
• 关键词: ストローマ; 造血幹細胞; 自己複製; レトロウイルス

マウスのストローマ細胞株MS-5は、ストローマ依存性多能性幹細胞株Myl-D-7の自己複製を支持する未知の機構を備えている。この機構の解明を目指し、平成10年度に、以下のことを行った。1。 ストローマ細胞株MS-5より得たの仏をレトロウイルスベクターに挿入し、ライブラリーを作成した。2。 このcDNAライブラリーをパッケージング細胞を介して、ストローマ依存性株Myl-D-7に遺伝子導入し、非依存性変異株を単離した。3。 しかし、単離した非依存性変異株の解析では、非特異的バックグランドが高いこと、cDNAの回収率が低いことにより、機構の解明に及ばなかった。4。 そこで、ベクターに以下の改変を行った。(1)ベクターに、バクテリオファージ由来のloxPの遺伝子配列を挿入した。(2)ベクター内にバクテリアでの選択薬剤耐性遺伝子を挿入した。5。 この改変したベクターを用いれば、(1)バクテリオファージのloxP/CREの系が応用可能である。単離した非依存性変異株より、loxP/CREの系による挿入cDNAの排斥、復帰変異株の再分離が可能である。復帰変異株分離による、バックグランドの低減化が期待できる。(2)挿入したバクテリアでの選択薬剤耐性遺伝子を用いて、ゲノムDNAからの回収率の向上が期待できる。6。 改変したベクターを用いて、再度、機構の解明を試みる予定である。

小鼠基质细胞系 MS-5 具有支持基质依赖性多能干细胞系 Myl-D-7 自我更新的未知机制。为了阐明这一机制，我们在 1998 年进行了以下工作。 1. 将从基质细胞系 MS-5 获得的病毒插入逆转录病毒载体中以创建文库。 2. 将该cDNA文库通过包装细胞导入基质依赖性菌株Myl-D-7中，并分离出独立的突变菌株。 3. 然而，由于高非特异性背景和低 cDNA 回收率，对分离的独立突变株的分析未能阐明其机制。 4. 因此，对载体进行了以下修改。 (1)将源自噬菌体的loxP基因序列插入载体中。 (2)将细菌选择耐药基因插入载体中。 5. 使用该修饰载体，(1)可以应用噬菌体loxP/CRE系统。从分离的独立突变株中，可以通过loxP/CRE系统排除插入的cDNA并重新分离回复突变株。恢复突变体的分离有望减少背景。 (2)通过使用所选择的插入细菌中的耐药基因，预计可以提高基因组DNA的回收率。 6. 我们计划尝试使用修改后的载体再次阐明该机制。

项目成果

O'Prey J et al: "signaling mechanisms inodued in long-term growth of ELM ergthroleukemia cells" Blood. 91. 1584-1555 (1998)

OPrey J 等人：“ELM ergthroleukemia 细胞长期生长中的信号传导机制”血液。

Xue JH et al: "Induction of apg-1, a member of the heat shock protein 110 family, follwing transient forebrain ischemia in the rat brain" Biochem.Biophys.Res.Commun.247. 796-801 (1998)

Xu JH 等人：“大鼠大脑短暂前脑缺血后，热休克蛋白 110 家族成员 apg-1 的诱导”Biochem.Biophys.Res.Commun.247。

Nishiyama H et al: "Decreased expression of cold-induced RNA-binding protein(CIRP)in male germ cells at elevocted temperature" Am J Path. 152. 289-296 (1998)

Nishiyama H 等人：“在升高的温度下雄性生殖细胞中冷诱导的 RNA 结合蛋白 (CIRP) 的表达降低”Am J Path。

Tatsumi K et al: "Expression of calcium binding protein D-YK messenger RNA in the mouse uterine endometrium during implantation" Mol.Human Reprod. 5. 153-161 (1999)

Tatsumi K 等人：“植入期间小鼠子宫内膜中钙结合蛋白 D-YK 信使 RNA 的表达”Mol.Human Reprod。