FMEVタイプのレトロウイルス・ベクターの転写制御領域の解析

FMEV型逆转录病毒载体转录控制区分析

• 批准号: 12036212
• 负责人: 伊藤 克彦
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kyoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 2000
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2000 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-12036212/
• 关键词: レトロウイルス; ベクター

我々は、新たなレトロウイルス・ベクター(FMEVタイプ)を作成し、このベクターが、従来のモロニー白血病ウイルス(MoMLV)由来のベクター以上に効率よい遺伝子発現をもたらすことを確認してきた。この効率よい遺伝子発現をもたらす、フレンド赤白血病ウイルス(SFFVp)long terninal repeat(LTR)のU3領域を解析する中で、Upstream Control Region(UCR)に強いシス活性を見い出した。本研究では、このシス活性を持つエレメントの解析を進めることを目的とした。平成12年度は、以下のことを行った。(1)SFFVpのUCRの領域に部分欠失を導入した、各種のLTR配列を作成した。(2)FMEVタイプのレトロウイルスベクターに、これらのLTR、マーカーとして、マウスCD8、および、chloramphenicol acetyltransferase(CAT)を組み込んだプラスミドを作成した。(3)これらのプラスミドを、パッケージング細胞にトランスフェクトし、感染性のベクターを得た。(4)ベクターを、種々の標的細胞株に感染させ、2日後にマーカーの発現量を、フローサイトメーターや、CAT ELISAで測定した。(5)欠失部分とマーカーの発現量から、UCR領域に存在するシス活性を持つエレメントがベクターのシス活性を制御する領域であることを確認した。(6)この領域に結合する蛋白を同定してゆく予定である。

我们创建了一种新的逆转录病毒载体（FMEV 型），并证实该载体比传统的莫洛尼白血病病毒（MoMLV）衍生载体提供更有效的基因表达。在分析 Friend 红白血病病毒 (SFFVp) 长末端重复序列 (LTR) 的 U3 区域时，我们发现上游控制区域 (UCR) 具有很强的顺式活性，该区域带来了这种有效的基因表达。在这项研究中，我们的目的是推进这种顺式活性元素的分析。 2000年，我们做了以下工作： (1)创建了多种LTR序列，其中在SFFVp的UCR区域中引入了部分缺失。 (2)制作将这些LTR、作为标记的小鼠CD8、以及氯霉素乙酰转移酶(CAT)整合到FMEV型逆转录病毒载体中的质粒。 (3)将这些质粒转染至包装细胞中，获得感染载体。 (4)用该载体感染各种靶细胞系，2天后，使用流式细胞仪或CAT ELISA测量标记物的表达水平。 (5)根据删除的部分和标记的表达水平，确认UCR区域中存在的顺式活性元件是控制载体的顺式活性的区域。 (6) 我们计划鉴定与该区域结合的蛋白质。

项目成果

Tsuji T et al.: "Retroviral vector-mediated gene expression in human CD34+38-cells expanded in vitro : cis-elements of FMEV are superior to those of MoMLV"Hum Gene Ther. 11. 271-284 (2000)

Tsuji T 等人：“体外扩增的人 CD34 38 细胞中逆转录病毒载体介导的基因表达：FMEV 的顺式元件优于 MoMLV 的顺式元件”Hum Gene Ther。

Tatsami K. et al.: "Induction of tryptophan 2,3-Dioxygenase in the mouse endometrium during implautation"Biochem Biophys Res Commun. 274. 166-170 (2000)

Tatsami K.等人：“植入期间小鼠子宫内膜中色氨酸2,3-双加氧酶的诱导”Biochem Biophys Res Commun。