MLK2キナーゼ依存性のMAPキナーゼ活性化におけるカルシウム結合蛋白質の役割

钙结合蛋白在 MLK2 激酶依赖性 MAP 激酶激活中的作用

基本信息

批准号：
10169221
负责人：
永田浩一
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Aichi Cancer Center Research Institute
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10169221/
关键词：
MAPキナーゼカルシウム情報伝達

项目摘要

Mixed lineage kinase(MLK)は、蛋白質燐酸化酵素の触媒領域を鋳型にしてPCR法で同定されたセリン・スレオニンーキナーゼである。構造上の特徴として、MLKsはSH3ドメイン、ロイシン-ジッパーを有するため、他の蛋白質と相互作用しながらその機能を発現していると考えられる。しかしながら、これらのキナーゼの細胞内情報伝達系における位置づけ、あるいは生理的機能は殆ど不明である。私共は、MLKがMAPKKKとして機能すること、MLK2/3は、CRIBモチーフと称される領域を介し低分子量GTPaseであるCdc42とRacに特異的に結合すること、海馬特異的Ca結合蛋白質ヒポカルシンとも結合することを明らかにしてきた。最近、神経細胞において、カルモジュリン依存性のCa情報伝達経路がJNK活性化を惹起する事が報告されている。そこで、カルモジュリン以外のCa結合蛋白質もMAPキナーゼ-カスケードの制御にかかわる可能性が考えられ、ヒポカルシン依存性Caシグナル経路とMAPキナーゼ活性化との連関を解明を試みた。最初に、MLK2におけるヒポカルシン結合領域を同定した。すなわち、ヒポカルシンはMLK2のc末端可変領域のうちのN末端部分(aa660-710)に結合することが酵母Two-hybrid法で明らかにされた。次いで、ヒポカルシンとMLK2をCOS細胞に強制発現させてMLK2依存性JNK活性化に与える影響を調べたが、有意な結果は得られなかった。また、研究遂行中に、新たなMLK2結合蛋白質としてプレクストリン相同領域(PHドメイン)を有するストラチフィンを同定した。

混合谱系激酶（MLK）是一种丝氨酸螺纹激酶，使用蛋白质磷化酶的催化区域通过PCR方法鉴定，作为霉菌。作为结构性特征，MLK具有SH3结构域和亮氨酸Zipper，因此人们认为它在与其他蛋白质相互作用时代表其功能。但是，这些激酶在细胞内信息传输系统或生理功能中的位置几乎是未知的。我们具有MAPKKK的MLK函数，MLK2/3是与Cdc42的特定结合，Cdc42是通过螃蟹基序的低分子量GTPase的特定结合，我透露它将连接。最近，据报道，钙调蛋白依赖性的CA信息翻译途径已导致神经细胞中的JNK激活。因此，认为除钙调蛋白以外的其他CA结合蛋白可能参与了MAP激酶-Cascade的控制，我们试图阐明Hipical SIN依赖性CA信号途径与MAP激酶激活之间的联系。首先，确定了MLK2中的HIPO CARSIN结合区域。换句话说，酵母双杂交方法表明，Hipocalcin与MLK2 C末端变量区域中的N末端（AA660-710）结合。接下来，在COS细胞中强行表达Hipocalcin和MLK2，以研究对MLK2依赖性JNK激活的影响，但没有获得显着结果。此外，在进行研究时，将具有pH结构域（pH结构域）的层蛋白鉴定为新的MLK2结合蛋白。