ヒト血小板及びラット唾液腺の分泌を調節する低分子量GTP結合蛋白質に関する研究

调节人血小板和大鼠唾液腺分泌的低分子量 GTP 结合蛋白的研究

基本信息

批准号：
06780500
负责人：
永田浩一
金额：
$ 0.64万
依托单位：
Gifu University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

1.血小板のモデル細胞系としてホルボールエステルにより分化誘導させたヒト巨核球系培養細胞MEG-01を用いて、各種G蛋白質などシグナル分子の分化誘導に伴う変動・分泌応答への関与について検討した。1)PMA処理により分化させたMEG-01細胞を用いてトロンビン刺激し、血小板α顆粒内蛋白質であるβ-トロンボグロブリンの産生・分泌を調べたが、著明な分泌亢進は認められなかった。2)MEG-01細胞は、三量体型G蛋白質、Gs,Gi_2,Gi_3,Gz,G_<11>G_<12>のαサブユニットおよびβサブユニットが蛋白質レベルで検出された。MEG-01細胞のPMAによる分化誘導により、三量体型G蛋白質のGi_2α,Gi_3αおよびGβが日のオーダーで漸増したが、他のものはほとんど変化しなかった。一方、低分子量G蛋白質のRac2は、PMA処理後30分から著明に増加した。3)PMA処理したMEG-01細胞から出現する血小板様顆粒を収集し、その低分子量G蛋白質のmRNAおよび蛋白質レベルでの発現を検討した。rap1A,rap1B,rap2B,ralA,rhoA,rac1,rac2,CDC42Hs,rab1,rab3B,rab4,rab6,ramおよびranについてRT-PCRを行ったところ、rab4以外のすべてのDNAの増幅を認めた。また、Rap1,RhoA,Rac,CDC42,Rab6,Rab8について蛋白質レベルでの発現が確認された。4)MEG-01細胞においてPKC-γ以外のPKCα,-βI,-βII,-δ,-ε,-η,-θおよび-ζの発現を認めたが、顆粒中にはPKC-γおよび-ζタイプが検出されなかった。蛋白質レベルで血小板に検出されるサブタイプはPKCα,-βI,-βIIおよび-ζであるが、顆粒中には量的に少ないがいずれも発現していた。MEG-01細胞では、上記4種に加えてPKC-εおよび-θが検出された。2.ラット唾液腺細胞の細胞分画により低分子量型Rap1pが顆粒膜に、三量体型G蛋白質Gtは形質膜に局在することが明らかとなった。

1。使用MEG-01，一种与佛波尔酯作为血小板的模型细胞系不同的人类巨核细胞，我们研究了与诱导信号分子（如各种G蛋白）诱导分化相关的变异和分泌反应的参与。 1）使用通过PMA治疗分化的MEG-01细胞刺激凝血酶，以检查β-脑球蛋白的产生和分泌，β-脑球蛋白是血小板α粒状蛋白，但没有观察到分泌的显着增加。 2）在MEG-01细胞中，在蛋白质水平上检测到三聚体G蛋白，GS，GI_2，GI_3，GZ，GZ，GZ，GZ，GZ，GZ，GZ，GZ，GZ，GZ，GZ，GZ，GZ，GZ，GZ，GZ，GZ，G_ <11> G_ <12>的α和β亚基。 MEG-01细胞中PMA分化的诱导导致三聚体G蛋白GI_2α，GI_3α和Gβ逐渐增加，但其他人几乎没有改变。另一方面，低分子量G蛋白Rac2从PMA处理后的30分钟开始显着增加。 3）收集从PMA处理的MEG-01细胞中出现的血小板样颗粒，并检查了mRNA下低分子量G蛋白的表达，并检查了蛋白质水平。当RT-PCR在Rap1a，Rap1b，Rap2b，Rala，Rhoa，Rac1，Rac2，Rac2，Cdc42hs，Rab1，Rab1，Rab1，Rab4，Rab4，Rab4，Rab6，Ram和Ran时进行时，所有DNA扩增都均已观察到Rab4。此外，在蛋白质水平上证实了RAP1，RAP1，RAC，RAC，CDC42，RAB6和RAB8的表达。 4）在MEG-01细胞中观察到PKCα，-βI，-βII，-βII，-Δ，-H，-η，-η，-θ和 - ζ的表达，但在颗粒中未检测到PKC-γ或-ζ类型。在蛋白质水平的血小板中检测到的亚型为PKCα，-βI，-βII和-ζ，但两者在颗粒中均以少量表达。在MEG-01细胞中，除了上述四个物种外，还检测到PKC-ε和-θ。 2。大鼠唾液腺细胞的细胞分馏表明，低分子量RAP1P位于颗粒上，三聚体G蛋白GT位于质膜。