胚中心B細胞に再発現するRAG遺伝子産物によるV(D)J再構成とその意義の解明

RAG基因产物在生发中心B细胞中重新表达的V(D)J重排及其意义的阐明

• 批准号: 10167213
• 负责人: 大森 斉
• 金额: $ 1.22万
• 依托单位: Okayama University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10167213/
• 关键词: 胚中心; 成熟B細胞; RAG遺伝子; V(D)J再構成; インターロイキン7

免疫グロブリン遺伝子のV(D)J recombinaseであるRAG-1,RAG-2はpro-B,pre-B細胞段階で発現しV(D)J再構成を行うが、成熟B細胞になるとその発現が停止しており、一度確定したV(D)Jの構成はその後の分化段階で保持されると考えられてきた。しかし、我々はin vitroでanti-CD40/IL-4で刺激したマウス成熟B細胞や、免疫したマウスリンパ節の胚中心(GC)B細胞にRAGが再発現してくることを見いだした。in vitro,in vivoにおいてRAG-1,RAG-2が再発現する条件で、Vλ1-Jλ1再構成の結果生じるcircular excision productが検出されたことから、再発現するRAGはV(D)J recombinaseとして活性であることが示された。このexcisionproductはリンパ節の胚中心内で主に生成していることがin situ PCRにより確認された。RAGの誘導に関与するサイトカインの解析から、IL-4以外にIL-7が同等の誘導活性を示すことを見いだした。また、成熟B細胞においても抗CD40とIL-7で刺激するとIL-7レセプターが発現してくることも発見した。IL-4(-/-)マウスでは免疫後のRAGの発現は正常であったが、抗IL-7R mAbを投与したマウスではその発現が強く抑制されたことから、in vivoではIL-7がより重要な役割を持つことが示唆された。抗IL-7R mAb投与によりGC形成が非特異的に抑制されることはなかった。抗IL-7R mAbを投与する我々の方法は、in vivoにおける特異的なRAG発現抑制方として極めて有用と考えられる。現在この方法を用いてGCにおけるRAG発現の生理的意義について解析を進めている。

RAG-1和RAG-2是免疫球蛋白基因的V(D)J重组酶，在pro-B和pre-B细胞阶段表达并进行V(D)J重排，但当它们成熟B时表达减少人们认为，V(D)J构型一旦建立，就会在随后的分化阶段得到维持。然而，我们发现RAG在体外用抗CD40/IL-4刺激的成熟小鼠B细胞和免疫小鼠淋巴结的生发中心(GC) B细胞中重新表达。在体外和体内重新表达RAG-1和RAG-2的条件下，检测到由Vλ1-Jλ1重排产生的环状切除产物具有活性。原位PCR证实该切除产物主要产生于淋巴结生发中心内。通过对参与RAG诱导的细胞因子的分析，我们发现除了IL-4之外，IL-7也表现出相似的诱导活性。他们还发现，当用抗 CD40 和 IL-7 刺激时，成熟 B 细胞中会表达 IL-7 受体。在IL-4(-/-)小鼠中，免疫后RAG表达正常，但在给予抗IL-7R mAb的小鼠中，其表达被强烈抑制，这表明IL-7在体内发挥了更重要的作用。重要作用。施用抗IL-7R mAb不会非特异性抑制GC形成。我们的施用抗IL-7R mAb的方法被认为作为特异性抑制体内RAG表达的方法非常有用。我们目前正在使用这种方法来分析GC中RAG表达的生理意义。

项目成果

Masaki Hikida: "Rerrangement of λ light chain genes in mature B cells in vitro and in vivo. Function of reexpressed recombination-activating gene(RAG) products." Jornal of Experimental Medicine. 187・5. 795-799 (1998)

Masaki Hikida：“体外和体内成熟 B 细胞中 λ 轻链基因的重排。重新表达的重组激活基因 (RAG) 产物的功能。实验医学杂志 187・5”。

疋田正喜: "成熟B細胞における免疫グロプリン遺伝子再構成" Annual Review免疫. 14-20 (1999)

Masaki Hikita：“成熟 B 细胞中的免疫球蛋白基因重排”年度免疫学评论 14-20 (1999)。

Masaki Hikida: "Expession of recombination activating in germinal center B cells : involement of interleukin 7 (IL-7) and the IL-7 receptor." Jornal of Experimental Medicine. 188・2. 365-372 (1998)

Masaki Hikida：“生发中心 B 细胞中重组激活的表达：白细胞介素 7 (IL-7) 和 IL-7 受体的参与。”实验医学杂志 188・2 (1998)。

Hiroshi Ohmori: "Expression and function of recombination activating genes in mature B cells." Critical Reviews in Immunology. 18・3. 221-235 (1998)

Hiroshi Ohmori：“成熟 B 细胞中重组激活基因的表达和功能。”免疫学评论 18・3（1998）。