カイコ前胸腺刺激ホルモンの立体構造解析と機能相関

家蚕前胸激素的结构分析及功能关系

• 批准号: 10161203
• 负责人: 永田 宏次
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: The University of Tokyo
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10161203/
• 关键词: 前胸腺刺激ホルモン(PTTH); 脱皮; 変態; 核磁気共鳴(NMR); 立体構造

昆虫の脱皮・変態において中心的な役割を担う前胸腺刺激ホルモン(PTTH)の立体構造決定を目的として、立体構造解析の標的としての各種PTTH分子の妥当性の評価、および、^<13>C,^<15>N標識Manduca PTTHの調製と多核多次元NMRの測定と解析を行った。1. 立体構造解析の標的としての各種PTTH分子の妥当性の評価非還元条件でのSDS-PAGE分析において、Bombyx PTTHは泳動度が小さくスメアだが、Manduca PTTHは泳動度が大きくシャープなバンドを形成する(松林秀貴、私信)。このことから、Manduca PTTHはBombyx PTTHに比べて、均一性が高くコンパクトな高次構造を有することが示唆された。ゆえに標的分子としてManduca PTTHを選択した。2. ^<13>C,^<15>N標識Manduca PTTHの調製と多核多次元NMRの測定と解析^<13>C,^<15>N標識Manduca PTTHを21のM9最少培地から1.4mg得た。スピン-スピン結合した^1Hと^<15>Nの相関を検出するHSQCスペクトルを測定・解析した結果、Manduca PTTHが、β構造に富む二次構造を持つこと、および、分子内で運動性の低い領域(rigidな高次構造をとる)と高い領域(flexibleで特定の高次構造を持たない)とに分けられることが示された。この結果から、NMR法によるManduca PTTH分子の立体構造決定が成功するめどがついた。現在、^1H-^<13>C-^<15>N三重共鳴三次元NMRの測定と解析を進めている。

为了确定蛋白螺旋刺激激素（PTTH）的三维结构，该结构在昆虫的分合和变质中起着核心作用，我们评估了各种PTTH分子作为构象分析的目标的有效性，并制备了 ^<13> c， ^<15> n l-n l-labeled manduca ptth和Multiment y Multiment and Multiment和分析。 1。评估各种PTTH分子作为在非还原条件下SDS-PAGE分析中的空间结构分析的靶标，Bombyx PTTH具有较小的迁移率，而Manduca PTTH则形成了具有较大迁移率的锋利带（Matsubayashi hideki，个人交流）。这表明Manduca Ptth比Bombyx PTTH具有更高的均匀性和紧凑的结构。因此，选择甘达Ptth作为靶分子。 2。^<13> c，^<15> n标记的曼达木ptth的制备以及测量和分析多核多维NMR^<13> c，^<15> n标记的manduca ptth是从21 m9最小培养基中获得的。检测自旋旋转结合 ^1H和 ^<15> n之间相关性的HSQC光谱的测量和分析表明，Manduca PTTH具有富含β结构的二级结构，并且可以将其分为具有较低迁移率的区域（具有较低的刚性结构）和更高级别的区域（具有灵活的区域，并且具有灵活的区域和特定的结构）。这些结果表明，通过NMR方法将成功使用Manduca PTTH分子的空间结构。目前，我们正在进行测量和分析^1H - ^<13> c - ^<15> n三维三维NMR。