ヒトセントロメア領域特異的ヌクレオソーム高次構造の解析

人类着丝粒区域特有的核小体构象分析

• 批准号: 10159208
• 负责人: 依田 欣哉
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Nagoya University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10159208/
• 关键词: ヒトセントロメア; CENP-A; CENP-B; αサテライトDNA; セントロメア特異的ヌクレオソーム; ジグザグモデル; in vitro再構成

Woodcockによるジグザグヌクレオソームモデルに次のような特徴を与え、セントロメア特異的ヌクレオソームとして提唱した。(1)1αサテライトユニット=1ヌクレオソームユニット、(2)CENP-Bboxの配置=規則的(2merに一回)、(3)ヌクレオソーム構造のポジショニング(CENP-Bboxはリンカー部に位置する)、(4)CENP-Bは二量体を形成し、DNAをおりたたむ、(5)セントロメア特異的ヒストンH3=CENP-Aを含む。このモデルを指導理念として実証的に実験を組み立て以下の結果を得た。(i)高品質の抗CENP-Aモノクローン抗体を作製した。(ii)オリゴレオソームを単離し免疫沈降法によってCENP-AとCENP-Bが同じオリゴヌクレオソーム上に存在することを証明した。この結果は、現在提唱しているモデルを支持する。(iii)CENP-A及びCENP-Bをバキュロヴィールス発現系によって発現し、精製した。ヌクレオソーム再構成系を構築しつつある。今後は、再構成系及びin vivo系を用いて、セントロメアヌクレオソーム構造の構造と機能を解明する。

Woodcock 提出的锯齿形核小体模型具有以下特征，并被提议作为着丝粒特异性核小体。 （1）1α卫星单元=1个核小体单元，（2）CENP-Bbox排列=规则（每2mer一次），（3）核小体结构定位（CENP-Bbox位于linker部分），（4）CENP-B形成二聚体并折叠 DNA，(5) 含有着丝粒特异性组蛋白 H3=CENP-A。以该模型为指导原则，我们进行了实证实验，得到了以下结果。 (i) 产生了高质量的抗CENP-A单克隆抗体。 (ii)我们分离了寡核小体，并通过免疫沉淀证明CENP-A和CENP-B存在于同一寡核小体上。该结果支持当前提出的模型。 (iii)使用杆状病毒表达系统表达和纯化CENP-A和CENP-B。我们正在构建核小体重构系统。未来，我们将利用重建和体内系统阐明着丝粒核小体结构的结构和功能。

项目成果

Kinya Yoda et al.: "In Vitro Assembly of the CENPB/α-satellite DNA/core histone cernplex:CENPB causes nucleosome bositioning" Genes to Cells. 3. 533-548 (1998)

Kinya Yoda 等人：“CENPB/α-卫星 DNA/核心组蛋白 cernplex 的体外组装：CENPB 导致核小体转移”基因到细胞。

Kinya Yoda et al.: "Centromere Specific Nucleosome S/rnetures in Hunam Cells:Study of CENP-A,the centronese jpecygic huione H3" Gurdor Research Conference on Molecular genetics. 1998 7月19〜23日. (1998)

Kinya Yoda 等人：“Hunam 细胞中的着丝粒特异性核小体 S/rnetures：CENP-A、centronese jpecygic huione H3 的研究”Gurdor 分子遗传学研究会议，1998 年 7 月 19-23 日。

T.Okazaki,K.Yoda et al.: "Human Centromere:Specific chnsmection orgonizatior and the alphord array competent to pnduee tuntinel ecntromss/kinetuchore thcueture" Third APUCB congress Abslracts. 8月24〜28. 18-18 (1998)

T.Okazaki、K.Yoda 等人：“人类着丝粒：特定的化学结构和能够实现隧道/动线结构的 Alphord 阵列”，第三届 APUCB 大会摘要，8 月 24-28 日（1998 年）。

安藤覚、依田欣哉: "ヒトセントロメア特異的ヌクレオソーム-in vivoヌクレオソームの単離" 第21回分子生物学会年会予稿集. 12月. 470-470 (1998)

Satoru Ando，Kinya Yoda：“人类着丝粒特异性核小体 - 体内核小体的分离”分子生物学学会第 21 届年会论文集 470-470（1998 年）。

依田欣哉他: "セントロメア特異的ヌクレオソーム構造-in vitro再構成系の構築" 第21回分子生物学会年会予稿集. 12月. 470-470 (1998)

Kinya Yoda 等人：“着丝粒特异性核小体结构 - 体外重建系统的构建”第 21 届分子生物学学会年会论文集 470-470（1998 年）。