ヒト染色体セントロメア(αサテライトDNA)領域における高次ヌクレオソーム構造

人类染色体着丝粒（α-卫星 DNA）区域的高阶核小体结构

基本信息

批准号：
08274207
负责人：
依田欣哉
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Nagoya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒトセントロメア領域を構成するαサテライトDNAとセントロメアタンパク質CENP-A、CENP-Bおよびコアヒストンとの相互作用によって構成されるセントロメア特異的ヌクレオソーム構造を解析し、これまでに以下の点を明らかにした。(i)CENP-Bboxの基本的分布様式が2mer毎に一回の規則的配列である(論文受理)。(ii)in vitro,in vivo解析からCENP-Bがヌクレオソーム構造のポジショニングを誘起する(論文投稿中)。(iii)CENP-A及びヒストンH2A、H2B、H3、H4を高度に精製しヌクレオソーム構造の再構成を行い、CENP-AがヒストンH3としての機能を持つことを示した(論文準備中)。本年度はこれらの成果を踏まえて、(i)HeLa細胞単離核を用いてDNaselフットプリント解析を行いCENP-Bbox周辺のヌクレオソーム構造がDNAヘリックスの回転ユニットに関しても厳密にポジショニングしていることを証明した(ロ-テ-ショナルポジショニング)。(ii)精製CENP-Aを用いたヌクレオソーム再構成系においてMNaseフットプリント解析を行い、CENP-BboxにCENP-Bが結合した条件下では、コアヒストンを用いたときと全く同一の超感受性部位がCENP-Bbox周辺に誘起されることを示した。この結果はさらにvivoに近い再構成系を組み立てることに成功したことを意味するもので意義深いと考えている。(iii)CENP-A抗体の作製を試みている。

已分析了由构成人类丝粒区域的α-催化DNA之间的相互作用和共内丝粒蛋白CENP-A，CENP-B和核心组蛋白之间的相互作用组成的中心粒特异性核小体结构，因此已经进行了分析，因此已经阐明了以下几点。（i）CENP-BBOX的基本发行样式是一个常规序列，每2mer（接受纸）。（ii）CENP-B诱导体外和体内分析的核小体结构的定位（论文提交）。（iii）CENP-A和组蛋白H2A，H2B，H3和H4高度纯化，并重建了核小体结构，以表明CENP-A作为组蛋白H3（制备中）起作用。基于这些结果，今年，我们（i）使用HeLa细胞分离的核分析了DNASEL足迹，以证明CENP-BBOX周围的核小体结构也与DNA螺旋的旋转单元（旋转位置）严格定位。（ii）使用纯化的CENP-A在核小体重建系统中进行了MNase足迹分析，并表明在CENP-BBOX与CENP-BBOX结合的条件下，与使用CENP-BBOX周围诱导的核心组蛋白相同的过敏部位与使用核心组合时完全相同。该结果很重要，这意味着它已经成功地组装了更接近体内的重建系统。（iii）我们正在尝试产生CENP-A抗体。