コンディショナル・ジーンノックイン法によるヒト急性骨髄性白血病モデルマウスの樹立

条件基因敲入法建立人急性髓系白血病小鼠模型

基本信息

批准号：
10151254
负责人：
美野輪治
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Japanese Foundation For Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

AML1伝子内で組換えが起こり,その結果融合遺伝子が生成する様な染色体転座がヒト急性骨髄性白血病AMLで高率に認められる。この染色体異常は,t(8;21)であり、慢性骨髄性白血病でもt(3;21)の転座が見られる。これらの転座により生じる、融合遺伝子に由来するAML1-MTG8及びAML1-EVI1キメラ遺伝子産物が造血幹細胞の癌化を引き起こす事により白血病が発症すると考えられるが、キメラ遺伝子産物の生体での機能はよく理解されてはいない。そこで、ヒト急性骨髄性白血病の発症状況に忠実に従い、AML1-MTG8及びAML1-EVI1キメラ遺伝子産物を、成体まで成長したマウスで、骨髄造血幹細胞のみに特異的に発現させるための世界的に全く前例を見ないコンデイショル・ジーンノックイン法を新たに開発し、これにより、ヒト急性骨髄性白血病モデルマウスを樹立する事を試みた。平成9年度までに我々は、AML1-MTG8及びAML1-EVI1コンデイショナル・ジーンノックインベクターを作製し、これをES細胞に導入して、ES細胞内でCre酵素による遺伝子変換(回転)が起きる事を確認した。更に,このES細胞からコンデイショナル・ジーンノックインalleleを持つマウスを作成した。平成10年度は、このコンデイショナル・ジーンノックインマウスを用いて、以下の結果を得た。1.骨髄造血幹細胞HPSの分離とCreによる遺伝子組み換えの確認:FAXによりSca-1+/c-kit+を指標としてコンデイショナル・ジーンノックインalleleを持っHPSを単離した。更に,HPSにadenovirus vectorを用いて遺伝子変換を誘導し、PCR-サザン法で遺伝子変換を確認した。現在骨髄造血幹細胞におけるキメラ蛋白の発現の確認を行っている。2.HPSに対するadenovinrus vectorの感染性が低いと考えられたので,遺伝子変換(回転)を誘導するためのCreの発現を,トランスジェニックマウス(CAG-Cre)とのかけ合わせによる方法を試みている。

染色体易位发生在AML1传感器中，导致融合基因的产生，在人类急性骨髓性白血病AML中高度观察到。这种染色体异常为T（8; 21），在慢性髓样白血病中也可以看到T（3; 21）的易位。尽管人们认为白血病发生在源自融合基因的AML1-MTG8和AML1-EVI1嵌合基因产物引起造血干细胞的癌症，但人体中嵌合基因产物的功能尚未得到充分了解。 Therefore, in accordance with the onset of human acute myeloid leukemia, we developed a completely unprecedented condition-shoulder gene knock-in method for specifically expressing AML1-MTG8 and AML1-EVI1 chimeric gene products in mice that have grown to adults, in which they have specifically expressed only myeloid hematopoietic stem cells, and by this, we attempted to establish a human acute myeloid leukemia型鼠标。到1997年，我们已经准备了AML1-MTG8和AML1-EVI1条件基因敲入载体，并将它们引入ES细胞中，以确认CRE酶在ES细胞内发生基因转化（旋转）。此外，由这些ES细胞产生了带有条件基因敲门等位基因的小鼠。 1998年，使用此条件基因敲入小鼠获得了以下结果。 1。通过使用SCA-1+/C-KIT+作为指示剂，通过传真分离了CRE：具有条件基因敲入等位基因的CRE的遗传重组的骨髓造血干细胞HP的分离。此外，使用腺病毒载体在HPS中诱导了基因转化，并通过PCR-Southern方法证实了基因转化。目前，我们正在确认嵌合蛋白在骨髓干细胞中的表达。 2。由于认为腺苷酸向量对HP的感染程度不那么感染，因此我们尝试使用一种表达CRE的方法来诱导基因转化（旋转），通过将其与转基因小鼠（CAG-CRE）相结合。