コンディショナル・ジーンノックイン法によるヒト急性骨髄性白血病モデルマウスの樹立

条件基因敲入法建立人急性髓系白血病小鼠模型

基本信息

批准号：
10151254
负责人：
美野輪治
金额：
$ 1.6万
依托单位：
Japanese Foundation For Cancer Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1998
资助国家：
日本
起止时间：
1998 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

AML1伝子内で組換えが起こり,その結果融合遺伝子が生成する様な染色体転座がヒト急性骨髄性白血病AMLで高率に認められる。この染色体異常は,t(8;21)であり、慢性骨髄性白血病でもt(3;21)の転座が見られる。これらの転座により生じる、融合遺伝子に由来するAML1-MTG8及びAML1-EVI1キメラ遺伝子産物が造血幹細胞の癌化を引き起こす事により白血病が発症すると考えられるが、キメラ遺伝子産物の生体での機能はよく理解されてはいない。そこで、ヒト急性骨髄性白血病の発症状況に忠実に従い、AML1-MTG8及びAML1-EVI1キメラ遺伝子産物を、成体まで成長したマウスで、骨髄造血幹細胞のみに特異的に発現させるための世界的に全く前例を見ないコンデイショル・ジーンノックイン法を新たに開発し、これにより、ヒト急性骨髄性白血病モデルマウスを樹立する事を試みた。平成9年度までに我々は、AML1-MTG8及びAML1-EVI1コンデイショナル・ジーンノックインベクターを作製し、これをES細胞に導入して、ES細胞内でCre酵素による遺伝子変換(回転)が起きる事を確認した。更に,このES細胞からコンデイショナル・ジーンノックインalleleを持つマウスを作成した。平成10年度は、このコンデイショナル・ジーンノックインマウスを用いて、以下の結果を得た。1.骨髄造血幹細胞HPSの分離とCreによる遺伝子組み換えの確認:FAXによりSca-1+/c-kit+を指標としてコンデイショナル・ジーンノックインalleleを持っHPSを単離した。更に,HPSにadenovirus vectorを用いて遺伝子変換を誘導し、PCR-サザン法で遺伝子変換を確認した。現在骨髄造血幹細胞におけるキメラ蛋白の発現の確認を行っている。2.HPSに対するadenovinrus vectorの感染性が低いと考えられたので,遺伝子変換(回転)を誘導するためのCreの発現を,トランスジェニックマウス(CAG-Cre)とのかけ合わせによる方法を試みている。

在人类急性髓性白血病 AML 中，大量观察到染色体易位，其中 AML1 基因内发生重组，导致融合基因的产生。这种染色体异常是t(8;21)，t(3;21)易位也在慢性粒细胞白血病中观察到。据认为，源自这些易位产生的融合基因的AML1-MTG8和AML1-EVI1嵌合基因产物通过引起造血干细胞癌变而引起白血病，但嵌合基因产物在活体内的功能尚不清楚。不明白。因此，根据人类急性髓性白血病的发病机制，我们决定在已生长至成年的小鼠骨髓造血干细胞中特异表达AML1-MTG8和AML1-EVI1嵌合基因产物，这在世界上完全是前所未有的。我们开发了一种新的条件基因敲入方法，该方法不允许开发人类急性髓系白血病模型小鼠。到1997年，我们已经创建了AML1-MTG8和AML1-EVI1条件基因敲入载体，将它们导入ES细胞，并证实Cre酶会在ES细胞内发生基因转换（旋转）。此外，带有条件基因敲入等位基因的小鼠是由这些 ES 细胞产生的。 1998年，我们利用这种条件基因敲入小鼠获得了以下结果。 1.骨髓造血干细胞HPS的分离并通过Cre确认基因重组：以Sca-1+/c-kit+为指标，通过FAX分离具有条件基因敲入等位基因的HPS。此外，使用腺病毒载体在HPS中诱导基因转化，并通过PCR-Southern法确认基因转化。我们目前正在确认嵌合蛋白在骨髓造血干细胞中的表达。 2.由于腺病毒载体对HPS的感染力被认为较低，因此我们尝试通过与转基因小鼠（CAG-Cre）杂交来表达Cre以诱导基因转换（旋转）。