cyclic ADP-ribose合成・分解酵素(CD38)の活性調節機構の解明

阐明环状ADP-核糖合成/降解酶（CD38）的活性调节机制

• 批准号: 08670132
• 负责人: 那谷 耕司
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08670132/
• 关键词: CD38; cyclic ADP-ribose; ADP-ribose cyclase; cyclic ADP-ribose hydrolase; 細胞内情報伝達物質; カルシウムイオン; ATP; クローニング

研究代表者らが新しく見出した細胞内情報伝達物質cyclic ADP-ribose (cADPR)は、リンパ球の表面抗原であるCD38により合成・分解される。またCD38のcADPR分解活性はATPにより抑制される。本研究の目的は、cADPR合成・分解酵素(CD38)のATP結合部位を同定することである。平成8年度の研究計画は、計画どおりに進行し、以下の様に期待された成果が得られた。1.研究代表者らはすでにヒトインスリノーマ由来のRNAを鋳型にしたPCR法によりヒトCD38cDNAを単離している(J. Biol. Chem. 268, 26052-26054, 1993)ので、このcDNAを発現ベクターpMAL-c2に組込み、大腸菌に導入した。2. 1.で発現ベクターを導入した大腸菌を培養した後溶菌し、大腸菌内でマルトースバインディングプロテインとして発現しているCD38蛋白をアミロースレジンカラムを用いて精製した。3.精製CD38をATPの類似体である5'- (p-fluorosulfonylbenzoyl) adenosine (FSBA)とインキュベーションして標識した後エンドペプチダーゼで消化し、得られたペプチド断片をHPLC法により分離・精製した。4.FSBAに対する抗体を用いたウエスタン・ブロット法により、分解・精製したペプチド断片のなかからFSBAで標識されたペプチド断片を同定した。5. 4.で同定したペプチド断片のアミノ酸配列をペプチドシークエンサーを用いて決定したところ、CD38の129番目のLysがFSBA結合部位であることが明らかとなった。以上の結果から、CD38のATP結果部位は129番目のLysであることが明らかになった。

研究代表新发现的细胞内信号物质环ADP-核糖（cADPR）是由淋巴细胞表面抗原CD38合成并降解的。此外，CD38 的 cADPR 降解活性被 ATP 抑制。本研究的目的是确定 cADPR 合成/降解酶 (CD38) 的 ATP 结合位点。 1996年的研究计划按计划进行，取得了预期成果如下。 1.主要研究人员已经使用人胰岛素瘤来源的RNA作为模板通过PCR分离了人CD38 cDNA(J. Biol. Chem. 268, 26052-26054, 1993)，因此该cDNA被用作表达载体pMAL -。 c2并引入大肠杆菌。 2.培养在1.中导入表达载体的大肠杆菌后，裂解细菌，并使用直链淀粉树脂柱纯化在大肠杆菌中表达为麦芽糖结合蛋白的CD38蛋白。 3.纯化的CD38通过与ATP类似物5'-(对氟磺酰基苯甲酰基)腺苷(FSBA)一起孵育进行标记，然后用内肽酶消化，并通过HPLC分离和纯化所得肽片段。 4.使用针对FSBA的抗体，通过Western印迹从降解和纯化的肽片段中鉴定出FSBA标记的肽片段。 5.当使用肽测序仪确定4.中鉴定的肽片段的氨基酸序列时，表明CD38的第129位的Lys是FSBA结合位点。由以上结果可知，CD38的ATP结果位点为Lys 129。

项目成果

東郷暁: "ATPによる膵β細胞内cyclic ADP-ribose生成の調節機構の解明" 糖尿病. (in press). (1997)

Akira Togo：“阐明胰腺 β 细胞中 ATP 产生环状 ADP-核糖的调节机制”糖尿病（出版中）。

池端史子: "糖尿病患者におけるCD38 (cyclic ADP-ribose合成・分解酵素)自己抗体の存在" 糖尿病. 39. 183-183 (1996)

Fumiko Ikebata：“糖尿病患者中 CD38（环状 ADP-核糖合成/降解酶）自身抗体的存在”糖尿病。 39. 183-183 (1996)

東郷暁: "インスリン分泌のセカンドメッセンジャーcyclic ADP-riboseの合成・分解酵素(CD38)のATPによる調節の分子機構" 分子糖尿病学. 7 (in press). (1997)

Akira Togo：“ATP 介导的环状 ADP-核糖合成/降解酶（CD38）调节的分子机制，胰岛素分泌的第二信使”《分子糖尿病学》7（出版中）。

Koji Nata: "Human gene encoding (ADP-ribosyl cyaclase/cylcic ADP-ribose hydrolase) : organization, nucleotide sequences and alternative splicing." Gene. (in press). (1997)

Koji Nata：“人类基因编码（ADP-核糖基环化酶/环状 ADP-核糖水解酶）：组织、核苷酸序列和选择性剪接。”

那谷耕司: "マウスReg I遺伝子を過剰発現する膵β細胞の増殖能:トランスジェニックマウスを用いた解析" 糖尿病. (in press). (1997)

Koji Natani：“过度表达小鼠 Reg I 基因的胰腺 β 细胞的增殖能力：使用转基因小鼠进行分析”（出版中）。