DNA除去修復機構とその修復欠損の分子病態

DNA切除修复机制及其修复缺陷的分子发病机制

基本信息

批准号：
08280101
负责人：
田中亀代次
金额：
$ 143.49万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至 1999
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08280101/
关键词：
DNA修復転写発がん色素性乾皮症酸化的DNA損傷コケイン症候群ノックアウトマウス HNPCC 遺伝子クローニングプロテアソーム p53 マクレオチド除去修復塩基除去修復ミスマッチ修復紫外線皮膚癌光回復 APエンドヌクレアーゼ

项目摘要

田中は、A群色素性乾皮症蛋白質、A及びB群コケイン症候群蛋白質、さらには、RNA polymerase IIと結合し、「転写と共役したヌクレオチド除去修復」及び転写機構に関与するXAB2蛋白質を同定し、XAB2が含まれる蛋白質複合体を精製した。質量分析法により、その構成因子をコードする遺伝子を同定した。マウスXAB2遺伝子をクローニングしてのち、XAB2遺伝子のノックアウトは胎児致死をもたらすことを明らかにした。RLGS法により、c-mycによるアポトーシス抑制に関わる転写因子がXPA欠損マウスの皮膚癌細胞で高発現していることを見つけた。花岡は、XP-V群の損傷DNA複製欠損を相補する蛋白質をHeLa細胞核抽出液より精製し、シクロブタン型ピリミジン2量体を乗り越えて正しく複製できる新規のDNAポリメラーゼであることを明らかにした。5例のXP-V群患者細胞において変異が確認されたことから、これがXPV責任遺伝子であることを証明した。安井は、8-オキソグアニンと誤対合したアデニンを切り出すヒトhMYH蛋白質が、ミトコンドリアと核に存在することを見つけた。また、光回復酵素のマウスホモログが日周リズムに必須の蛋白であることを示した。関は、大腸菌endonuclease IIIの哺乳類ホモログNTHL1遺伝子と結節性硬化症遺伝子TSC2とは、head to headで近接して存在し、両遺伝子の転写は基本的には両方向性のコアプロモーターで調節されていることを明らかにした。山泉は、電離放射線照射後のp53蛋白質セリン15のリン酸化がその安定化・活性化に重要であることを明らかにした。また、DDB2遺伝子に変異を持つXP-E群患者を見出し、この患者細胞ではピリミジン2量体の修復は正常だが6-4光産物の修復に遅れが認められることから、DDB2が6-4光産物の後期の修復に関与している可能性を示唆した。福重は、遺伝性非腺腫症性大腸癌の家系に見られる59種のhMLH1胚細胞変異のうち、50種でhMLH1-hPMS2相互作用の強い阻害を観察し、これがミスマッチ修復機構破壊の主な原因と考えた。

Tanaka 鉴定了 A 组色素性干皮病蛋白、A 组和 B 组科凯恩综合征蛋白以及 XAB2 蛋白，该蛋白与 RNA 聚合酶 II 结合并参与“转录偶联核苷酸切除修复”和转录机制，并纯化了一种蛋白复合物。含有XAB2。通过质谱法鉴定编码组成因子的基因。克隆小鼠 XAB2 基因后，他们发现敲除 XAB2 基因会导致胎儿死亡。使用RLGS方法，我们发现参与c-myc抑制细胞凋亡的转录因子在XPA缺陷小鼠的皮肤癌细胞中高表达。 Hanaoka从HeLa细胞核提取物中纯化了一种蛋白质，可以补充XP-V组受损的DNA复制缺陷，并揭示它是一种新型DNA聚合酶，可以克服环丁烷型嘧啶二聚体并正确复制。该突变在 XP-V 组的 5 名患者的细胞中得到证实，证明这是导致 XPV 的基因。安井发现人类 hMYH 蛋白存在于线粒体和细胞核中，该蛋白可切除与 8-氧代鸟嘌呤不匹配的腺嘌呤。我们还表明，光复活酶的小鼠同源物是昼夜节律的必需蛋白质。 NTHL1 基因（大肠杆菌核酸内切酶 III 的哺乳动物同源物）和结节性硬化症基因 TSC2 的位置非常接近，并且这两个基因的转录基本上受到双向核心启动子的调节。 Yamaizumi透露，电离辐射照射后p53蛋白中丝氨酸15的磷酸化对于其稳定和激活很重要。另外，我们在XP-E组中发现了DDB2基因突变的患者，并发现在这些患者的细胞中，嘧啶二聚体的修复是正常的，但6-4个光产物的修复出现了延迟。暗示可能涉及产品后期修复。 Fukushige 在遗传性非腺瘤性结直肠癌家族中发现的 59 个 hMLH1 生殖细胞突变中的 50 个中观察到 hMLH1-hPMS2 相互作用受到强烈抑制，这表明我认为这是错配修复机制被破坏的主要原因。