色素性乾皮症の分子機構の解析

色素性干皮病的分子机制分析

基本信息

批准号：
04260216
负责人：
田中亀代次
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

日光照射部位の皮膚がん高頻度発生と知能低下を始めとした種々と精神神経症状発症を臨床的特徴とし、DNA障害の除去修復機備に異常をもつことが知られている色素性乾皮症(XP)A群の原因遺伝子(XPAC遺伝子)をクローニングし、そのDNA修復機能を解析した。XPACcDNAの塩基配列の解析から、XPAC蛋白はZnフィンガーモチーフを有し、DNA結合能を持つことが推測されたので、大腸菌で組換えXPAC蛋白を生成し、ゲルシフト法、フィルター結合法にてそのDNA結合能を解析した。その結果、XPA倍蛋白は、紫外線照射しないDNAにも結合したが、紫外線照射したDNAに3〜4倍多く結合し、XPAC蛋白はDNA除去修復過程のDNA損傷を認識するステップに関与することが示唆された。一方、XPAC蛋白は、DNA修復に関わる他の蛋白と複合体を形成することが予想されたので、GST-XPAC融合蛋白をグルタチオンビーズに不動化しておき、これに細胞抽出液を混ぜ、XPAC蛋白と結合する蛋白の単離を試みた。何種類もの蛋白がXPAC蛋白に結合したが、そのうちのあるものは、XPAC蛋白のポケットドメインと思われるペプチドや、抗XPA抗体でその結合が阻害された。さらに、紫外線照射したDNAをこの系に介在されると、XPAC蛋白との結合が増強する蛋白もあった。このような蛋白は、細胞内でもDNA修復過程においてXPAC蛋白と結合することが示唆された。XP患者の病態を解析する目的で、ES細胞を用いたXPAC遺伝子ターゲッティング法により、XPAC遺伝子を欠損したホモ接合体マウスを樹立した。このマウス由来の細胞は、A群XP細胞同様に、紫外線に高感受性を示し、DNA除去修復能に異常を示した。

着色性干皮病的临床特征是暴露在阳光下的区域皮肤癌的高发病率和各种神经精神症状的发展，包括智力下降，并且已知我们克隆了DNA损伤的去除和修复机制的异常。研究了导致疾病（XP）A组的基因（XPAC基因）并分析了其DNA修复功能。对XPAC cDNA的碱基序列分析表明，XPAC蛋白具有Zn指基序，具有DNA结合能力，因此，我们在大肠杆菌中制备了重组XPAC蛋白，并采用凝胶迁移法和过滤结合法与DNA结合。能力进行了分析。结果，XPA蛋白与未受紫外线照射的DNA结合，但与经紫外线照射的DNA结合3至4倍，这表明XPAC蛋白参与了识别DNA损伤的步骤。建议进行 DNA 切除修复过程。另一方面，由于预测XPAC蛋白与参与DNA修复的其他蛋白形成复合物，因此我们尝试将GST-XPAC融合蛋白固定在谷胱甘肽珠中，并将细胞提取物与其混合。结合的蛋白质。几种类型的蛋白质与 XPAC 蛋白质结合，但其中一些蛋白质的结合受到被认为是 XPAC 蛋白质口袋结构域的肽和抗 XPA 抗体的抑制。此外，当将紫外线照射的 DNA 引入该系统时，一些蛋白质显示出与 XPAC 蛋白质的结合增强。有人认为，即使在细胞内，此类蛋白质也会在 DNA 修复过程中与 XPAC 蛋白质结合。为了分析XP患者的病理学，我们利用ES细胞的XPAC基因打靶方法建立了缺乏XPAC基因的纯合小鼠。源自该小鼠的细胞与 A 组 XP 细胞一样，对紫外线表现出高度敏感性，并表现出 DNA 切除修复能力异常。