色素性乾皮症の分子機構の解析

色素性干皮病的分子机制分析

基本信息

批准号：
04260216
负责人：
田中亀代次
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Osaka University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

日光照射部位の皮膚がん高頻度発生と知能低下を始めとした種々と精神神経症状発症を臨床的特徴とし、DNA障害の除去修復機備に異常をもつことが知られている色素性乾皮症(XP)A群の原因遺伝子(XPAC遺伝子)をクローニングし、そのDNA修復機能を解析した。XPACcDNAの塩基配列の解析から、XPAC蛋白はZnフィンガーモチーフを有し、DNA結合能を持つことが推測されたので、大腸菌で組換えXPAC蛋白を生成し、ゲルシフト法、フィルター結合法にてそのDNA結合能を解析した。その結果、XPA倍蛋白は、紫外線照射しないDNAにも結合したが、紫外線照射したDNAに3〜4倍多く結合し、XPAC蛋白はDNA除去修復過程のDNA損傷を認識するステップに関与することが示唆された。一方、XPAC蛋白は、DNA修復に関わる他の蛋白と複合体を形成することが予想されたので、GST-XPAC融合蛋白をグルタチオンビーズに不動化しておき、これに細胞抽出液を混ぜ、XPAC蛋白と結合する蛋白の単離を試みた。何種類もの蛋白がXPAC蛋白に結合したが、そのうちのあるものは、XPAC蛋白のポケットドメインと思われるペプチドや、抗XPA抗体でその結合が阻害された。さらに、紫外線照射したDNAをこの系に介在されると、XPAC蛋白との結合が増強する蛋白もあった。このような蛋白は、細胞内でもDNA修復過程においてXPAC蛋白と結合することが示唆された。XP患者の病態を解析する目的で、ES細胞を用いたXPAC遺伝子ターゲッティング法により、XPAC遺伝子を欠損したホモ接合体マウスを樹立した。このマウス由来の細胞は、A群XP細胞同様に、紫外線に高感受性を示し、DNA除去修復能に異常を示した。

临床上以神经精神症状的发作（包括阳光和智力部位的高频率皮肤癌）在临床上以神经精神症状的发作（包括高频率的皮肤癌）的病原基因（XPAC基因）是克隆的及其因素损害的作用，并在降低的智力上进行了克隆，并在智力上进行了分析。 XPAC cDNA的碱基序列的分析表明，XPAC蛋白具有Zn指基序，并且具有结合DNA的能力，因此在大肠杆菌中产生了重组XPAC蛋白，并使用凝胶转移和滤光片结合分析其DNA结合能力。结果，Xpa折叠蛋白还与不被紫外线照射的DNA结合，但与紫外线照射的DNA结合了3-4倍，这表明XPAC蛋白在DNA切除修复过程中识别DNA损伤的步骤。另一方面，由于预计XPAC蛋白会与参与DNA修复的其他蛋白质形成复合物，因此将GST-XPAC融合蛋白固定在谷胱甘肽珠中，并将细胞提取物与此混合以隔离与XPAC蛋白结合的蛋白质。与XPAC蛋白结合的几种类型的蛋白质，其中一些蛋白质被似乎是XPAC蛋白的口袋域或抗XPA抗体抑制。此外，当在该系统中介导紫外线辐照的DNA时，还有一些蛋白质增强了与XPAC蛋白的结合。已经提出，这种蛋白质在DNA修复细胞内细胞期间与XPAC蛋白结合。为了分析XP患者的病理，使用ES细胞通过XPAC基因靶向方法建立了缺乏XPAC基因的纯合小鼠。源自该小鼠的细胞对紫外线高度敏感，类似于A组XP细胞，并且表现出异常的DNA去除和修复能力。