ニワトリのインスリンおよびIGF-Iレセプターの構造の解明

鸡胰岛素和 IGF-I 受体结构的阐明

基本信息

批准号：
07760259
负责人：
加藤久典
金额：
$ 0.7万
依托单位：
Utsunomiya University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1995
资助国家：
日本
起止时间：
1995 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760259/
关键词：
インスリンインスリン様成長因子レセプターニワトリ

项目摘要

ニワトリ脳より作製したcDNAライブラリーから、ニワトリインスリンレセプターのcDNAを得た。塩基配列の解析の結果、N末端にあたる部分を欠いているが、細胞外のリガンド結合部位からC末端および3'非翻訳領域を含む3.3kbのクローンであることが判った。ニワトリのインスリンレセプターのアミノ酸配列をラットやヒトのものと比較すると、チロシンキナーゼ領域では約93%と高い相同性を有していた。細胞膜近傍部位では約80%であり、一方C末端領域では63%と低く、サブ領域により種間の特異性が著しく異なることが明らかとなった。ヒトインスリンレセプターのチロシンキナーゼ活性やインターナリゼーションなどに必要と報告されているアミノ酸モチーフは、全て保存されていた。ラットやヒトでインスリンレセプターのエクソン11は、細胞外領域の一部をコードし、このエクソンは選択的に利用されたりされなかったりすることが明らかとなっている。得られたニワトリのcDNAではこの部分は含まれていなかったため、様々な組織から調整したRNAによりRT-PCRを行い、この部分を持つmRNAが存在するかどうかを検討した。いずれの組織でもエクソン11部分を含むmRNAは検出されず、哺乳類で報告されている選択的スプライシングによるレセプター活性の調節機構は存在しないことが判明した。一方、ニワトリIGF-Iレセプターの細胞外領域のcDNAも取得したので、塩基配列を解析した結果、哺乳類のものと83%のアミノ酸ホモロジーを有し、24個存在するシステインは全て保存されていることなどが明らかとなった。

鸡胰岛素受体cDNA是从鸡脑制备的cDNA文库中获得的。核苷酸序列分析的结果是，它是一个3.3kb的克隆，缺乏N端部分，但含有来自胞外配体结合位点的C端和3'非翻译区。将鸡胰岛素受体的氨基酸序列与大鼠和人的氨基酸序列进行比较，发现酪氨酸激酶区域具有约93%的高度同源性。在靠近细胞膜的区域大约为80%，而在C末端区域则低至63%，这表明物种之间的特异性根据子区域的不同而显着不同。据报道，酪氨酸激酶活性和人胰岛素受体内化所需的所有氨基酸基序都是保守的。在大鼠和人类中，胰岛素受体的外显子11编码部分细胞外区域，并且已经表明该外显子被选择性地使用或不使用。由于获得的鸡cDNA不包含该区域，因此使用从各种组织制备的RNA进行RT-PCR以检查是否存在包含该区域的mRNA。在任何组织中均未检测到含有外显子 11 的 mRNA，这表明在哺乳动物中报道的通过选择性剪接调节受体活性的机制并不存在。另一方面，我们还获得了鸡IGF-I受体胞外区的cDNA，并分析其碱基序列，发现其与哺乳动物有83%的氨基酸同源性，且24个半胱氨酸全部保守。等等变得清晰起来。