アポプロテインC-IIとC-IIIによる鶏脂肪組織リポプロテインリパーゼ反応の制御機構

脱辅基蛋白C-II和C-III对鸡脂肪组织脂蛋白脂肪酶反应的控制机制

• 批准号: 07760258
• 负责人: 佐藤 幹
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Tohoku University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07760258/
• 关键词: 鶏; リポプロテインリパーゼ; Apo C-II; Apo C-III; Apo A-I

(1)鶏、ラットおよびヒトの血漿から超遠心で分離したカイロミクロンおびVLDLからMorrisettらの方法によりApoproteinを調製した。分離したApoproteinを6M尿素で可溶化後、分子量1万の限外濾過により得たApo C群をMno Q^Rに供し、0.4MまでのNaCl直鎖グラディントで溶出した。各種動物から調製したいずれの試料も、0.1〜0.2M付近にリポプロテインリパーゼ(LPLase)活性化作用を示すApo C-IIのピークが溶出した。さらに、ヒトでは、Apo C-IIIを含むと考えられる0.25M付近のピーク(Apo C-III画分)にはミルクLPLase阻害活性が確認されたが、ラットのApo C-III画分はラットLPLase活性に殆ど影響せず、鶏Apo C-III画分が鶏LPLase活性を逆に活性化した。(2)鶏Apo C-IIIの存在の有無を確認するために、逆相カラム(Resource RPC)を用いて鶏Apo C-III画分を分離精製し、N末端分析を行った。逆相カラムではメインピークと多数のマイナ-ピークが検出された。メインピークのN末端アミノ酸配列は鶏Apo A-Iと100%の相同性を示し、Apo A-Iの部分分解物であることが明らかとなった。PMSFなどのProtease阻害剤を添加しても、同物質がメインピークであることから、鶏リポプロテインにはApc C-IIIは存在せず、かわりにApo A-Iの分解物が存在して、しかもApo A-Iの分解物は鶏LPLase活性化作用がある可能性が示唆された。(3)トリオレインエマルジョンに鶏Apo C-IIおよびApo A-I分解物を30μg/ml添加したところ、鶏LPLaseのVmはいずれも上昇したが、Apo A-I分解物の上昇率はApo C-IIの約1/3であった。(現在、本結果の投稿を準備中である)

(1)按照Morrisett等人的方法，从鸡、大鼠和人血浆中超速离心分离出乳糜微粒和VLDL，制备脱辅基蛋白。将分离的Apo蛋白用6M尿素溶解后，将超滤得到的分子量为10,000的Apo C基团进行Mno Q^R，并用线性梯度的NaCl直至0.4M洗脱。在从各种动物制备的所有样品中，显示脂蛋白脂肪酶(LPLase)活化活性的Apo C-II峰在0.1至0.2M左右被洗脱。此外，在人类中，在0.25M（Apo C-III级分）附近的峰中确认了牛奶LPLase抑制活性，认为其含有Apo C-III，但发现大鼠Apo C-III级分对LPLase具有抑制活性。大鼠 LPLase。鸡 Apo C-III 组分反向激活鸡 LPLase 活性，但对其活性影响很小。 (2)为了确认鸡Apo C-III的有无，使用反相柱(Resource RPC)分离精制鸡Apo C-III级分，进行N末端分析。使用反相柱检测到一个主峰和许多次峰。主峰N端氨基酸序列与鸡Apo A-I具有100%同源性，表明其为Apo A-I的部分降解产物。即使添加PMSF等蛋白酶抑制剂，该物质也是主峰，因此鸡脂蛋白中不存在Apc C-III，而是存在Apo A-I的降解产物，并且Apo的降解产物被认为是A-I可能对鸡LPLase有激活作用。 (3)当三油酸甘油酯乳液中添加30 μg/ml的鸡肉Apo C-II和Apo A-I分解产物时，鸡肉LPLase的Vm均升高，但Apo A-I分解产物的升高幅度与Apo C-II 是 1/3。 （目前正在准备发布结果）