新規リポプロテインレセプターの機能解析-低脂肪食肉・卵生産システム開発の基盤-

新型脂蛋白受体的功能分析 - 低脂肉蛋生产系统开发的基础 -

基本信息

批准号：
14760175
负责人：
佐藤幹
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

安全性・疾病予防性を持つ高品質畜産食品(食肉・卵)の効率生産システムの開発を目標として、低脂肪食肉・卵生産システムの開発研究の一貫として、申請者がはじめて発見した新規リポプロテインレセプターであるLRP380に着目して、その同定・機能解析・発現制御を試みた。(1)LRP380のリガンドの検索前年度に確立した精製法により精製したLRP380を用いて,そのリガンドを検索した。LRP380は,鶏VLDL,LDLのリポタンパク質,ビタミンAやDの結合タンパク質,RAPやapoJなどのレセプター関連タンパク質に結合した。さらに,約200kDaの巨大タンパク質と非常に強い結合性を示した。LRP380はヒトmegalinのホモログであるため,この分子はgp280(Cubilin)である可能性が示唆された。gp280は,近年マルチリガンドレセプターとして認識されており,特に腎臓尿細管における物質取り込みを制御していることが明らかとなっている。すなわち,鶏卵巣において,LRP380がCubilinと共同で,卵黄に機能性物質を取り込む役割を果たしているものと推察された。(2)LRP380の局在性鶏の前駆脂肪細胞および成熟した脂肪細胞のいずれにもLRP380は発現しており,細胞膜に局在していた。しかし,いずれの細胞にも検出されることから,脂肪蓄積との関与は明らかとはならなかった。(3)LRP380の生体内における分子生物学的機能解析in vivoトランスフェクションのためのコンストラクト作製を試みたが,全長が約15kbpと大きいため,ライゲーション効率が低く,現時点では成功していない。また,プロモーター解析のための5領域のクローニングに成功し,現在,機能解析を進めている。

为了开发安全且预防疾病的高质量牲畜食品（肉和鸡蛋）的有效生产系统，我们试图通过关注新的脂蛋白受体LRP380来识别，分析和控制其表达，这是申请人首次发现的申请人，这是对低脂肉类和鸡蛋的开发研究的一部分。（1）使用上一年中建立的纯化方法纯化纯化的LRP380搜索LRP380 LRP380的配体搜索配体。 LRP380与鸡VLDL结合，LDL中的脂蛋白，维生素A和D的结合蛋白，以及与受体相关的蛋白（例如RAP和APOJ）。此外，它具有大约200 kDa的巨型蛋白质表现出非常强大的结合特性。由于lrp380是人梅加林的同源物，因此建议该分子可以是gp280（cubilin）。近年来，GP280被认为是多号受体，并且已证明可以调节物质摄取，尤其是在肾小管中。换句话说，据估计，LRP380与Cabilin合作在将功能性物质纳入鸡蛋蛋黄中发挥了作用。（2）LRP380局部lrp380 lrp380在鸡的前脂肪细胞和成熟的脂肪细胞中表达，并定位于细胞膜。但是，由于在两个细胞中都检测到它，因此尚不清楚其参与脂肪积累。（3）我们试图分析体内LRP380的分子生物学功能，以创建用于体内转染的构建体，但总长度大约为15 kbp，导致连接效率较低，并且目前尚未成功。此外，已经成功克隆了五个区域进行启动子分析，目前正在进行功能分析。