新規リポプロテインレセプターの機能解析-低脂肪食肉・卵生産システム開発の基盤-

新型脂蛋白受体的功能分析 - 低脂肉蛋生产系统开发的基础 -

基本信息

批准号：
14760175
负责人：
佐藤幹
金额：
$ 1.86万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Young Scientists (B)
财政年份：
2002
资助国家：
日本
起止时间：
2002 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

安全性・疾病予防性を持つ高品質畜産食品(食肉・卵)の効率生産システムの開発を目標として、低脂肪食肉・卵生産システムの開発研究の一貫として、申請者がはじめて発見した新規リポプロテインレセプターであるLRP380に着目して、その同定・機能解析・発現制御を試みた。(1)LRP380のリガンドの検索前年度に確立した精製法により精製したLRP380を用いて,そのリガンドを検索した。LRP380は,鶏VLDL,LDLのリポタンパク質,ビタミンAやDの結合タンパク質,RAPやapoJなどのレセプター関連タンパク質に結合した。さらに,約200kDaの巨大タンパク質と非常に強い結合性を示した。LRP380はヒトmegalinのホモログであるため,この分子はgp280(Cubilin)である可能性が示唆された。gp280は,近年マルチリガンドレセプターとして認識されており,特に腎臓尿細管における物質取り込みを制御していることが明らかとなっている。すなわち,鶏卵巣において,LRP380がCubilinと共同で,卵黄に機能性物質を取り込む役割を果たしているものと推察された。(2)LRP380の局在性鶏の前駆脂肪細胞および成熟した脂肪細胞のいずれにもLRP380は発現しており,細胞膜に局在していた。しかし,いずれの細胞にも検出されることから,脂肪蓄積との関与は明らかとはならなかった。(3)LRP380の生体内における分子生物学的機能解析in vivoトランスフェクションのためのコンストラクト作製を試みたが,全長が約15kbpと大きいため,ライゲーション効率が低く,現時点では成功していない。また,プロモーター解析のための5領域のクローニングに成功し,現在,機能解析を進めている。

申请人首次发现的一种新脂蛋白，作为低脂肉蛋生产系统研发的一部分，旨在开发一种高品质畜牧食品（肉蛋）的高效生产系统，我们重点关注受体LRP380，并尝试对其进行鉴定、功能分析和表达调控。 (1)寻找LRP380的配体利用前年建立的纯化方法纯化的LRP380，我们寻找其配体。 LRP380 与鸡 VLDL、LDL 脂蛋白、维生素 A 和 D 结合蛋白以及受体相关蛋白（如 RAP 和 apoJ）结合。此外，它显示出与约 200 kDa 的大蛋白质的非常强的结合。由于LRP380是人巨蛋白的同源物，因此有人认为该分子可能是gp280（Cubilin）。 GP280 最近被认为是一种多配体受体，并且已表明它特别控制肾小管中的物质摄取。也就是说，推测在鸡卵巢中，LRP380发挥着与Cubilin协同作用，将功能性物质掺入蛋黄中的作用。 (2)LRP380的定位 LRP380在鸡前脂肪细胞和成熟脂肪细胞中均表达，且定位于细胞膜。然而，由于它在所有细胞中都被检测到，因此它与脂肪积累的关系尚不清楚。 (3)LRP380体内分子生物学功能分析我们尝试构建用于体内转染的构建体，但由于总长度约15kbp，连接效率较低，目前尚未成功。我们还成功克隆了五个区域用于启动子分析，目前正在进行功能分析。