鶏脂肪細胞分化シグナル制御因子の同定とその発現制御

鸡脂肪细胞分化信号调节因子的鉴定及其表达调控

基本信息

批准号：
12760184
负责人：
佐藤幹
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Tohoku University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
2000
资助国家：
日本
起止时间：
2000 至 2001
项目状态：
已结题

项目摘要

脂肪過剰蓄積の実用的簡易制御法の確立を目標として、前駆脂肪細胞から脂肪細胞への分化機構とその制御因子を同定することにより、脂肪細胞数の調節・制御を試みることを目的とした。本年度は、分化制御シグナルタンパク質の同定、サブトラクションライブラリーからの分化制御遺伝子のクローニングおよび同定された因子の発現変動を観察した(1)鶏脂肪細胞の分化期におけるCa^<2+>結合性タンパク質の同定鶏前駆脂肪細胞を分化誘導させた後の脂肪細胞のCalmodulineカラム吸着画分に特徴的に観察された80kDaのタンパク質を酵素処理し、アミノ酸配列を確認したところ、FAT/CD36のホモログであると推定された。また、タンパク量としては多くはないものの、VLDLreceptor(LR8)がwestern blotより検出された。(2)鶏脂肪細胞の分化期に特徴的な遺伝子のサブトラクションLibraryからのスクリーニング前年度に作成したサブトラクションライブラリーから約60個のクローンを採取し、異なるサイズのクローンを25種選出し、シーケンスを行ない、未知のものについては全長を決定した。脂肪細胞の分化に関与すると報告されている遺伝子は検出されなかったが、既知のものではacidic phosphoproteinおよびLR8が、未知ではあるものの哺乳動物で配列が決定されているのもではLysosomal amino acid transfer protein 1(LAAT1)が検出された。一方、これまでまったく機能が推測されていない遺伝子が新たに3種検出された。未知遺伝子のなかの1種(WWE related proteinと命名)は、発生に関与するタンパク質の1つであるDeltexに存在するWWE domeinを持っていた。(3)分化シグナル制御因子の細胞生化学的追求(1)および(2)で検出されたFAT/CD36、LR8およびWWE related proteinの分化に伴う発現変動を観察した。半定量的RT-PCRにより各mRNAの発現量を測定したところ、いずれのmRNAも分化の進行に伴って発現の上昇が認められた。さらに、FAT/CD36およびLR8についてはWestern blotおよび細胞の免疫染色を行ない、分化した脂肪細胞で強く発現していることが観察された。

为了建立一种实用且简单的控制脂肪过度堆积的方法，我们旨在通过明确前脂肪细胞向脂肪细胞的分化机制及其调节因素来尝试调节和控制脂肪细胞的数量。今年，我们鉴定了分化控制信号蛋白，从消减文库中克隆了分化控制基因，并观察了鸡脂肪细胞分化阶段中所鉴定因子的表达变化。诱导鸡前脂肪细胞分化后，在脂肪细胞的钙调蛋白柱吸附部分中观察到特征性的80kDa蛋白质，用酶处理并确认氨基酸序列，发现它是FAT/CD36的同源物。估计此外，通过蛋白质印迹检测到VLDL受体（LR8），尽管蛋白量不大。 (2)从消减文库中筛选鸡脂肪细胞分化阶段的特征基因从上一年创建的消减文库中收集了大约60个克隆，选择了25个不同大小的克隆并测序了总长度。确定了未知项目。没有检测到与脂肪细胞分化有关的基因，但已知的基因包括酸性磷蛋白和LR8，以及未知但已在哺乳动物中确定其序列的溶酶体氨基酸转移蛋白1（LAAT1）。另一方面，检测到了三个迄今为止其功能尚未被预测的新基因。其中一种未知基因（称为 WWE 相关蛋白）的 WWE 结构域存在于 Deltex（参与发育的蛋白质之一）中。 (3)我们观察了分化过程中细胞生化追寻分化信号调节因子(1)和(2)中检测到的FAT/CD36、LR8和WWE相关蛋白表达的变化。当通过半定量RT-PCR测量每种mRNA的表达水平时，观察到随着分化的进展，每种mRNA的表达增加。此外，对FAT/CD36和LR8进行Western blot和细胞免疫染色，观察到它们在分化的脂肪细胞中强烈表达。