Ca^<2+>-非依存性ホスホリパーゼA_2活性調節因子としてのATPの意義

ATP 作为 Ca^2+ 独立的磷脂酶 A_2 活性调节剂的意义

• 批准号: 07771682
• 负责人: 神谷 真子
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Asahi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1995
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1995 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-07771682/
• 关键词: ホスホリパーゼA_2; 分泌顆粒; ATP; 膜融合

本研究は、耳下腺分泌顆粒(SG)のCa^<2+>-非依存性ホスホリパーゼA_2(SG-PLA_2)活性制御機構について、活性上昇効果を認めたATPの作用機序を中心に検討したものである(Mizuno-Kamiya et al., Biochim. Biophys. Acta,投稿中)。PLA_2活性の制御機構としては、近年多くの細胞でGTP-結合タンパク質(G-タンパク質)の関与が提唱されている。しかし本実験系では、(1)ATPに比較してGTPのSG-PLA_2に対する活性上昇効果が低いこと、(2)G-タンパク質の機能発現に必須であるMg^<2+>を反応系から取り除いても、ATPの効果が低下しないことから、ATPがGTPアナログとして機能している可能性はほぼ除外できた。またプロテインキナーゼAの活性化因子であるcyclic AMPや、プロテインキナーゼCおよびカルモジュリンキナーゼ系の活性発現に必須であるCa^<2+>の添加は、ATPの活性上昇効果を増強せず、非選択的かつ強力なプロテインキナーゼ阻害剤のK-252aも、ATPの効果を全く阻害しなかった。従って、ATPがプロテインキナーゼ類の基質として作用している可能性も少ない。一方、SG膜から可溶化したSG-PLA_2に対しても、ATPは可溶化前と同程度の活性上昇効果を示した。以上の結果を総合すると、ATPのSG-PLA_2に対する活性上昇作用は、ATPを基質あるいは補欠分子とする一連の酵素系を介するものではなく、直接酵素タンパク質に作用している可能性が示唆された。本酵素の生理的意義としては、その代謝産物である遊離脂肪酸が、in vitroで膜融合調節作用を示すことから、開口分泌との関連性が注目される(Mizuno-Kamiya et al., 1995, J. Biochem., 118, 693-699)。今後、分泌刺激時の細胞内ATP濃度と本酵素活性の変動を追跡することで、ATPによるSG-PLA_2の活性化の意義がさらに明確になるものと思われる。

这项研究的重点是ATP的作用机制，ATP的作用机理对CA^<2+> - 独立的磷脂酶A_2（SG-PLA_2）具有活性的作用，对腮腺分泌颗粒（SG）（SG）（Mizuno-Kamiya等人，BioChim.Biophys。Biophys。Acta，Acta）的活性控制机制。作为控制PLA_2活性的一种机制，近年来已经在许多细胞中提出了GTP结合蛋白（G蛋白）的参与。但是，在这个实验系统中，与ATP相比，（1）GTP对SG-PLA_2的影响几乎可以排除在ATP中，并且（2）即使Mg^<2+>的效果也不会降低，即使Mg^<2+>也不会降低，这对于G-Protein在G-Prote上的表达至关重要，因此G-Prote在Gortem function functy function function function function the Reactions contractions contractions均可消除反应系统。 Furthermore, the addition of cyclic AMP, an activator of protein kinase A, and Ca^<2+>, essential for the expression of protein kinase C and calmodulin kinase system, did not enhance the activity-increasing effect of ATP, and neither K-252a, a non-selective and potent protein kinase inhibitor, inhibited the effect of ATP at all.因此，ATP几乎没有可能充当蛋白激酶的底物。另一方面，ATP还显示出对从SG膜溶解的SG-PLA_2的类似活动效应，就像溶解之前一样。综上所述上述结果，建议ATP对SG-PLA_2的活性增强作用不是通过使用ATP作为底物或假体分子的一系列酶系统，而是可以直接作用于酶蛋白上。该酶的生理意义在于，其代谢物的无脂肪酸在体外表现出膜融合调节特性，因此它们与开放分泌的关联引起了人们的关注（Mizuno-Kamiya等，1995，J。Biochem。，J。Biochem。，118，693-699）。将来，通过跟踪细胞内ATP浓度的变化以及该酶在分泌刺激期间的活性，ATP激活SG-PLA_2的重要性将变得更加清晰。

项目成果

Sun-Ok Shin: "Acyl-CoA synthetase activity in rat salivary gland microsomes" Japanese Journal of Oral Biology. 38. 139-144 (1996)

Sun-Ok Shin：“大鼠唾液腺微粒体中的酰基辅酶A合成酶活性”日本口腔生物​​学杂志。

Koji Yashiro: "Microsomal diacylglycerol acyltransferase in rat parotid and submandibular glands: Acylation of 1, 2-dioleoyl-sn-glycerol dispersed with phospholipids" The International Journal of Biochemistry and Cell Biology. (in press).

Koji Yashiro：“大鼠腮腺和下颌下腺中的微粒体二酰甘油酰基转移酶：用磷脂分散的 1, 2-二油酰-sn-甘油的酰化”国际生物化学和细胞生物学杂志。

Koji Yashiro: "Substrate specificity of microsomal 1-acyl-sn-glycero-3-phospho-inositol acyltransferase in rat submandibular gland for polyun-saturated long-chain acyl-CoAs" Biochimica et Biophysica Acta. 1258. 288-296 (1995)

Koji Yashiro：“大鼠颌下腺微粒体 1-酰基-sn-甘油-3-磷酸肌醇酰基转移酶对多不饱和长链酰基辅酶 As 的底物特异性”Biochimica et Biophysicala Acta。

Masako Mizuno-Kamiya: "The significance of membrane lipids in exocytosis: control of liposome-evoked, amylase release from secretory granules isolated from the rat parotid gland" Journal of Biochemistry. 118. 693-699 (1995)

Masako Mizuno-Kamiya：“膜脂在胞吐作用中的重要性：控制从大鼠腮腺分离的分泌颗粒中脂质体诱发的淀粉酶释放”《生物化学杂志》。