耳下腺Ca^<2+>-非依存性ホスホリパーゼA_2の多様性とその生理的機能分担

腮腺Ca^2+非依赖性磷脂酶A_2的多样性及其生理功能

• 批准号: 09771558
• 负责人: 神谷 真子
• 金额: $ 1.15万
• 依托单位: Asahi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1997
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1997 至 1998
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-09771558/
• 关键词: Ca^<2+>-非依存性ホスホリパーゼA_2; 分泌顆粒膜; 細胞質; 腺腔側形質膜; 細胞内局在性; bromoenol lactone; 可溶化

本研究は、ラット耳下腺細胞におけるCa^<2+>-非依存性ホスホリパーゼA_2(iPLA_2)の多様な存在特性を明らかにするために、その耳下腺細胞内分布および性状を検討したものである。iPLA_2の細胞内分布に関しては、平成9年度に各細胞画分における活性検索が終了しており、既に報告した分泌顆粒(SG)と腺腔側形質膜(PM)に加え、新たに細胞質でもiPLA_2の存在が確認された。本年度は引き続き3画分由来iPLA_2の詳細な特性観察を進めその相同性を検討した。3画分のiPLA_2のうち、細胞質iPLA_2(Cyt-iPLA_2)は1)ATPとTriton X-100で活性化される、2)Ca^<2+>-依存性PLA_2特異的阻害剤(AACOCF_3)でほとんど阻害されずbromoenol lactone(BEL)で阻害される点から、VI型に分類される酵素であると考えられた。一方SGとPM由来iPLA_2(SG-iPLA_2、PM-iPLA_2)は、ATP、界面活性剤およびAACOCF_3に対してCyt-iPLA_2と類似の挙動を示したが、BELで阻害されない点でCyt-iPLA_2と異なっていた。また、SG-およびPM-iPLA_2には、既知の細胞内PLA_2に共通の阻害剤(metyl arachidonyl fluoro-phosphonate)も無効であったことから、両酵素は新たなタイプのiPLAであると考えられた。SG-およびPM-iPLA_2はsn-2位不飽和型中性リン脂質を最も良い基質とするなど基質特異性の面でも類似しており、一連の生化学的性質からは両者を明確に区別することができなかった。以上の結果は、耳下腺細胞内にはVI型に分類されるCyt-iPLA_2と、SGとPMに共通して存在する新たなタイプのiPLA_2の少なくとも2種類の酵素が存在する可能性を示唆するものである。今後はSG-およびPM-iPLA_2の精製と構造解析を進め両酵素の相同性を厳密に検討すると共に、これら耳下腺iPLA_2の開口分泌などの生理機能への関与を検討していく予定である。

本研究探讨了Ca^2+非依赖性磷脂酶A_2(iPLA_2)在大鼠腮腺细胞中的分布和性质，以阐明其各种特性。关于iPLA_2的细胞内分布，1997年完成了各细胞级分的活性探索，确认了其存在。今年，我们继续观察这三个组分的 iPLA_2 的详细特征，并研究它们的同源性。在iPLA_2的三个部分中，细胞质iPLA_2(Cyt-iPLA_2)被认为1)被ATP和Triton X-100激活，和2)被Ca ^ 2+ 依赖性PLA_2特异性抑制剂(AACOCF_3)激活。是VI型酶，因为它几乎不被抑制并且被溴烯醇内酯(BEL)抑制。另一方面，SG和PM衍生的iPLA_2（SG-iPLA_2、PM-iPLA_2）对ATP、表面活性剂和AACOCF_3表现出与Cyt-iPLA_2相似的行为，但与Cyt-iPLA_2不同的是它不受BEL抑制。曾是。此外，一种已知的细胞内 PLA_2 常见抑制剂（花生四烯基氟膦酸酯）对 SG- 和 PM-iPLA_2 也无效，表明这两种酶都是新型 iPLA。 SG-和PM-iPLA_2在底物特异性方面相似，其中sn-2-不饱和中性磷脂是最好的底物，但根据一系列生化特性可以清楚地区分两者。上述结果表明，腮腺细胞中可能存在至少两种类型的酶：分类为VI型的Cyt-iPLA_2，以及SG和PM共有的新型iPLA_2。未来，我们计划纯化和分析SG-和PM-iPLA_2的结构，严格检查两种酶的同源性，并研究腮腺iPLA_2在胞吐作用等生理功能中的参与。

项目成果

Masako Mizuno-Kamiya: "ATP-mediated activation of Ca^<2+>-independent phospholipase A_2 in the secretory granular membranes from the rat parotid gland" The Journal of Biochemistry. 123・2. 205-212 (1998)

Masako Mizuno-Kamiya：“大鼠腮腺分泌颗粒膜中Ca^2+-独立磷脂酶A_2的ATP介导的激活”生物化学杂志123・2（1998）。

Akira Shinkai: "Analyses of membrane phospholipid compositions and their physical properties in rat parotid gland" Journal of Gifu Dental Society. 25・2(印刷中). (1998)

Akira Shinkai：“大鼠腮腺膜磷脂组成及其物理性质的分析”《岐阜牙科学会杂志》25·2（出版中）。