in vitro分泌モデル系を用いた調節性開口分泌制御機構の解析

使用体外分泌模型系统分析调节性胞吐控制机制

• 批准号: 08771630
• 负责人: 神谷 真子
• 金额: $ 0.64万
• 依托单位: Asahi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-08771630/
• 关键词: 開口分泌; 膜融合; リポソーム; ホスファチジン酸; ジアシルグリセロール; ホスホリパーゼD; ホスホリパーゼA_2

本研究では調節性開口分泌の制御機構を解明する一端として、膜融合部位での脂質組成変化の重要性を検討した。in vitro分泌モデル系を用いて、単離分泌顆粒(SG)と、形質膜のモデルである各種リポソームとをインキュベートしたところ、ホスファチジン酸(PA)または1,2-ジアシルグリセロール(1,2-DAG)を含有したリポソームで、それぞれの濃度依存的にアミラーゼ遊離と膜融合の促進が観察された。これらの促進効果はPAと1,2-DAGに特異的であり、他の酸性リン脂質や1,2-DAGの構造異性体である1,3-DAGではほとんど観察されなかった。一方、遊離脂肪酸(FFA)は、その分子種によって全く異なった作用を示しており、パルミチン酸に代表される飽和脂肪酸はアミラーゼ遊離を顕著に抑制したのに対し、高度不飽和脂肪酸ではわずかながら促進傾向を示した。同様の結果は、リポソームの代わりに耳下腺細胞から単離した形質膜画分を用いた場合にも観察された。すなわち、ホスホリパーゼD(PLD)処理により形質膜画分中のPA含量を増加させた膜ではSGとの膜融合が促進された。また、ホスホリパーゼA_2(PLA_2)処理によって不飽和FFA含量を増加させると、リポソームを用いた系より明確に、その膜融合促進効果が観察された。耳下腺におけるこれら脂質の生成系を検索したところ、腺腔側形質膜にSGと同様のPLA_2活性が検出され、さらに、腺腔側形質膜で、PLD-PAホスファターゼ系によると考えられる一過性のPAの生成と、持続的な1,2-DAGの生成が観察された。一方、1,2-DAGの消去系として、肝に比べて十倍以上高いDAGアシルトランスフェラーゼ活性が、腺腔側形質膜を精製する前段階のミクロソーム画分で検出された。以上の結果は、PAなどの脂質性融合促進因子が実際の開口分泌部位においても生成していることを示唆しており、これら因子の生成が膜融合を初発とする唾液開口分泌の制御に関与している可能性が指摘できた。

在这项研究中，我们研究了膜融合位点脂质组成变化的重要性，这是阐明协调开放分泌的控制机制的一端。使用体外分泌模型系统，磷脂酸（PA）或1,2-Diaylgredolor（1,2-DAG（1,2-DAG）（1,2-DAG ））在包含脂质体中），通过每个浓度依赖性观察到淀粉酶和膜融合的促进。这些促进效应特异于PA和1,2-DAG，在其他酸性磷脂和1,3-DAG中几乎没有观察到，这是1,2-DAG的结构结构。另一方面，自由脂肪酸（FFA）表现出完全不同的影响，具体取决于数学，饱和脂肪酸（例如寄生酸）显着抑制了淀粉酶分离，其高饱和脂肪酸的高饱和脂肪酸略有促进。当从乳头细胞而不是脂质体闲置转换剂馏分时，也观察到了相同的结果。也就是说，磷脂酶D（PLD）加工增强了膜在膜中与SG的融合，从而增加了塑料膜绘画中含有PA的PA。此外，当磷脂酶A_2（PLA_2）加工增加了不饱和的FFA含量时，比使用脂质体显然观察到促进膜融合的效果明显地观察到了膜融合的效果。当在腮腺中搜索这些脂质生产系统时，在腺的边线膜中检测到与SG相同的PLA_2活性，而PLD-PA Hosfatase System则被认为是全球性的副业膜。观察到可持续的1,2-DAG。另一方面，作为1,2-DAG的橡皮擦，DAG-Actultansferase酶活性的活性比肝脏绘制的较小阶段的绘画比肝脏的绘画高十倍以上。以上结果表明，在实际分泌位点也产生了致命的融合促进因子，这些因素的产生是对唾液开放分泌的控制，这是我的第一个薄膜融合。这样做的可能性。

项目成果

Koji Yashiro: "Microsomal diacylglycerol acyltransferase in rat parotid and submandibular glands : Acylation of 1,2-dioleoyl-sn-glycerol dispersed with phospholipids" International Journal of Biochemistry and Cell Biology. 28・8. 895-903 (1996)

Koji Yashiro：“大鼠腮腺和颌下腺中的微粒体二酰基甘油酰基转移酶：用磷脂分散的 1,2-二油酰-sn-甘油的酰化”国际生物化学和细胞生物学杂志 28・8（1996）。