Ca^<2+>-非依存性ホスホリパーゼA_2の分泌刺激に連動した活性制御機構の解明

阐明与Ca^2+非依赖性磷脂酶A_2的分泌刺激相关的活性控制机制

• 批准号: 05771535
• 负责人: 神谷 真子
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Asahi University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05771535/
• 关键词: ホスホリパーゼA_2; 分泌顆粒; ATP; GTP

本研究は,既にラット耳下腺分泌顆粒で報告しているCa^<2+>非依存性ホスホリパーゼA_2(PLA_2)活性制御機構について,活性上昇効果を認めているATPの作用を中心に検討したものである(Biochim.Biophys.Acta投稿中)。ATPによる本酵素の活性上昇現象は,ATPをGTPに置き換えても観察されたが,その上昇率はATPに比較して低く,GTPgammaSでは殆ど認められなかった。この傾向はEDTAにより反応系中のMg^<2+>を取り除いた場合でも同様であった。これらの結果は,ATPの活性上昇作用が,近年いくつかのPLA_2で提唱されている“GTP結合タンバク質"を介入する機構によるものではないことを示している。ATPによる活性化は,反応系から分泌顆粒の可溶性画分を取り除くと著しく低下し,新たに可溶性画分を添加することにより,濃度依存的な活性化効果の回復が認められた。当初,心筋由来のCa^<2+>非依存性PLA_2における報告と類似したATP作用仲介因子の存在が,分泌顆粒可溶性画分中に予想されたが,熱処理した可溶性画分あるいはウシ血清アルブミンの添加によっても同様の回復が観察されたことから,むしろ,一定のタンパク質濃度を保つことが,ATP作用の安定化に寄与していると考えられた。一方,高濃度のCa^<2+>の存在下ではATPによる活性化現象は全く認められず,GTPgammaSで著しい活性抑制現象が観察された。以上の結果は,分泌顆粒由来PLA_2,およびその活性制御機構の特殊性を明確に指摘できるものであり,今後は,本酵素の精製を進め,酵素タンパク質本位とATPとの相互作用の解析により,分子レベルでの活性制御機構を明らかにすると共に,分泌刺激との関連性についても検討する予定である。

这项研究的重点是ATP的作用，ATP已经在Ca^<2+>非依赖性磷脂酶A_2（PLA_2）活性控制机制中报道了，这是一件事情。 ACTA发布）。即使将ATP替换为GTP，也观察到ATP的活性上升现象，但上升速率低于ATP，并且GTPGAMMAS很少认识到它。即使通过EDTA除去反应系统中的Mg^<2+>，也是如此。这些结果表明，ATP的活性上升并不是由于近年来在某些PLA_2中提出的机制。当从反应系统中去除可溶性颗粒时，ATP的激活显着降低，并通过添加新的溶液绘画观察到浓度依赖性激活效应的恢复。最初，与Ca^<2+>非依赖性的PLA_2相似的ATP - action经纪因子在分泌颗粒和可溶性溶剂中的存在，但这是一种热处理的可溶性筛选或洞穴 - 蛋白蛋白通过加法观察到相同的回收率，人们认为维持某种蛋白质浓度有助于稳定ATP作用。另一方面，在高浓度的Ca^<2+>存在下，根本没有发现ATP激活现象，并且在GTPGAMMAS中观察到了显着的活性抑制现象。可以通过源自PLA_2的分泌颗粒及其活性控制机制来清楚地指出，将来将促进该酶的精炼，并将分析酶蛋白质和ATP之间的相互作用阐明分子水平的活性控制机制，并检查分泌刺激的相关性。

项目成果

Yutaka Yokota: "Regulation of phospholipid metabolism and its functional rela-tions to secretory exocytosis in rat salivary glands" Dendistry in Japan. 30(in Press). (1993)

Yutaka Yokota：“磷脂代谢的调节及其与大鼠唾液腺分泌胞吐作用的功能关系”日本 Dendistry。

Koji Yashiro: "Changes in microsomal lysophospholipid acyltransferase activity are correlated with gland enlargement induced by chronic administration of isoproterenol in rat parotid gland" Journal of Biochemistry. (in press). (1994)

Koji Yashiro：“微粒体溶血磷脂酰基转移酶活性的变化与长期给予大鼠腮腺异丙肾上腺素引起的腺体增大相关”《生物化学杂志》。