歯周組織での一酸化窒素(NO)産生と細胞傷害

牙周组织中一氧化氮 (NO) 的产生和细胞损伤

• 批准号: 06857160
• 负责人: 白川 哲夫
• 金额: $ 0.58万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
• 财政年份: 1994
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1994 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06857160/
• 关键词: 一酸化窒素; Nitric Oxide; 歯根膜; Nitric Oxide Synthase; 細胞培養

1.結果 ヒト菌根膜細胞の一酸化窒素(NO)産生能を調べるため、細胞培養系を用いて実験を行った。矯正治療を目的として抜去された永久歯から歯根膜組織を分離し、トリプシン処理したのち血清添加MEMを用いて細胞の培養を行った。培養開始から1カ月後に同様の条件で約10^4個/培養皿として7日間の培養を行い、培養液中に含まれるNO_2の量をグリース反応法により測定した。NO_2濃度は培養開示後12時間より上昇し、72-120時間後にほぼプラトーに達した。培養皿当たりのNO_2濃度の増加量は最高で8.5μM/24時間であった。NO_2の増加が一酸化窒素合成酵素(NOS)によるものかどうかを明らかにするため、NOSの競合的阻害剤であるL-N^G-Nitroarginine Methyl EsterHCI(L-NAME)1mMを培養液に加え、NO_2濃度を測定した。その結果、培養120時間までのNO_2産生量はL-NAMEにより約70%抑制された。今回の実験では3人の患者の抜去歯から分離した細胞を用いたが、同じ歯根膜組織から分離した培養細胞では培養皿間のNO_2濃度のばらつきは小さかったのに対し、異なる個体から得た培養細胞によるNO_2産生量を比較すると、最高で10倍近い差が認められた。2.考察と展望 本研究の結果からヒト歯根膜由来の細胞にNO産生能があること、およびこのNOは歯根膜由来の細胞に発現したNOSにより産生された可能性が高いことが示唆された。この結果を裏付けるためには組織学的手法によるNOSの同定が必要であろう。また、歯根膜細胞に発現するNOSには内皮型(cNOS)とマクロファージ型(iNOS)の2つのタイプが考えられるが、今回はいずれのNOSによるものかを明らかにするには至らなかった。今後、無血清培地での細胞培養を確立し、iNOSの誘導因子を含まない(あるいは投与した)条件下でNO産生能を調べる予定である。

1.结果 为了研究人菌根膜细胞的一氧化氮（NO）产生能力，使用细胞培养系统进行了实验。从正畸治疗时拔出的恒牙中分离出牙周膜组织，用胰蛋白酶处理，然后使用添加血清的 MEM 进行培养。培养开始1个月后，将细胞在相同条件下培养7天，每个培养皿约10^4个细胞，通过格里斯反应法测定培养液中所含的NO_2量。 NO_2浓度从培养开始后12小时开始增加，并在72-120小时后几乎达到平台。每个培养皿NO_2浓度最大增加量为8.5μM/24小时。为了澄清NO_2的增加是否是由于一氧化氮合酶(NOS)引起的，在培养基中添加了1mM的NOS竞争性抑制剂L-N^G-硝基精氨酸甲基酯HCl(L-NAME)的浓度。结果，培养120小时后，L-NAME抑制了约70%的NO_2产生。在本实验中，使用了从3名患者的拔牙中分离出的细胞，但是对于从同一牙周膜组织中分离出的培养细胞而言，培养皿之间的NO_2浓度的变化较小，而培养皿之间的NO_2浓度的变化也较小。比较培养细胞产生的NO_2量，观察到差异高达10倍。 2.讨论与展望本研究结果提示人牙周膜来源细胞具有产生NO的能力，并且这种NO很可能是由牙周膜来源细胞表达的NOS产生的。为了证实这一结果，需要使用组织学方法鉴定 NOS。此外，牙周膜细胞中表达的NOS有两种可能的类型：内皮型（cNOS）和巨噬细胞型（iNOS），但在本研究中无法阐明哪种类型的NOS负责。未来，我们计划在无血清培养基中建立细胞培养物，并在不含（或施用）iNOS诱导剂的条件下检查NO产生能力。