歯冠修復材料に含まれる内分泌攪乱物質が発達期の脳に及ぼす影響とその分子機構

牙冠修复材料中内分泌干扰物对大脑发育的影响及其分子机制

• 批准号: 14657539
• 负责人: 白川 哲夫
• 金额: $ 2.18万
• 依托单位: Hokkaido University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Exploratory Research
• 财政年份: 2002
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2002 至 2003
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-14657539/
• 关键词: ビスフェノールA; DNAマイクロアレイ; 視床下部; 視交叉上核; 新生ラット; catechol-o-methyltransferase; mRNA; エストロジェン受容体; 内分泌攪乱物質; 神経伝達物質; ビスフェノールA; DNAマイクロアレイ; 視床下部; 視交叉上核; 新生ラット; catechol-o-methyltransferase; mRNA; エストロジェン受容体; 内分泌攪乱物質; 神経伝達物質

1)新生ラット脳での遺伝子発現に及ぼすビスフェノールAの影響生後1日齢の雄ラットにビスフェノールA(BPA)100μgを皮下投与したのち2,6時間後に断頭して脳組織を摘出し、視床下部、小脳、大脳皮質、脳幹の4つの部位毎に全RNAを抽出した。抽出したRNAから逆転写によりcDNAを合成、これを鋳型として蛍光ラベルしたcRNAを作製した。このcRNAについて、遺伝子発現プロファイルをAffimetrix社製DNAマイクロアレイ(GeneChip)を用いて解析したところ、いずれの部位においてもBPA投与6時間後のcatechol-O-methyltransferase (COMT) mRNAの発現量が低下していた。BPAが脳内のエストロジェン受容体(ER)を介してCOMT遺伝子発現を抑制するメカニズムを想定して、ERのアゴニストである17β-エストラジオール(E2)、ERαのアゴニストであるpropylpyrazole triol (PPT)、ERのアンタゴニストであるICI182780をBPAと同様の方法で生後1日齢の雄ラットに投与した。その結果、E2ならびにPPTはBPAと同様に脳でのCOMT mRNAの発現を抑制すること、またICI182780はその作用を部分的に阻害することが明らかになった。このことは、BPAによるCOMT mRNA発現の抑制にERαを介する核内メカニズムが関与していることを示している。2)新生ラット視床下部でのCOMT遺伝子発現生後1〜16日齢のラットについて、視床下部でのCOMT mRNAの発現分布とそのレベルをin situ hybridization法により調べた。その結果、生後1,2日齢では視交叉上核でCOMT mRNAの強い発現が認められ、silver grainの局在から、COMT mRNAは視交叉上核の神経細胞に強く発現していることが分かった。生後5日より視交叉上核でのCOMT mRNA発現は弱まり、生後16日では生後1日齢に比べその強度は半分以下に低下した。免疫組織染色法によりCOMT蛋白の局在を調べたところ、COMTは視交叉上核の神経細胞のほか、脳室上衣細胞やミクログリアにも強く発現していることが明らかになった。これらの結果より、新生仔の視床下部の神経細胞に発現するCOMTは、神経終末より放出されるカテコールアミンの代謝に直接関与している可能性が示唆された。

1）在2-6小时后2-6小时后，将100μg双酚A（BPA）皮下施加到雄性大鼠后，将双足A A对新遗物大鼠大脑的基因表达对雄性大鼠进行了分配，将脑组织斩首和去除，并为四个部位提取总RNA：cererbellamus and cerebrelmum，cerebralmum and cererbellal cort and cere and core and core cort and brain and cort and corort cort and cort and cort and cort and contral cort and cort and cort。通过逆转录合成提取的RNA，并使用该模板制备荧光标记的CRNA。当使用Affimetrix生产的DNA微阵列（Genechip）分析该CRNA的基因表达谱时，在BPA施用6个小时后，所有位点都会降低Catechol-O-O-甲基转移酶（COMT）mRNA的表达水平。假设BPA通过大脑中的雌激素受体（ER）抑制COMT基因表达的机制，17β-雌二醇（E2），ER的激动剂，丙基吡喃唑三醇（PPT）和ER的ER拮抗剂，ER的ER拮抗剂，ICI182780，ER的ER的Antageist，ER的抗体，是对1 Day of 1 Day of 1 Day of Maled Male to n of 1 Day of bpa。结果表明，像BPA一样，E2和PPT抑制了COMT mRNA在大脑中的表达，而ICI182780部分抑制了其作用。这表明ERα介导的核机制参与BPA抑制COMT mRNA的表达。 2）COMT基因在出生后1至16天大的大鼠新生大鼠下丘脑中的表达，通过原位杂交研究了下丘脑中COMT mRNA的表达分布和水平。结果，在出生后1或2天，在上核核中观察到了COMT mRNA的强表达，银纹的定位表明，在肩部核中的神经元中，COMT mRNA强烈表达。与出生后的1天相比，在出生后5天和出生后16天相比，在出生后16天后，强度降低了不到一半的强度，将其强度降低了一半。当通过免疫组织化学染色检查COMT蛋白的定位时，揭示了COMT在上核中的神经元中强烈表达，以及心室的脑常德氏症细胞和小胶质细胞。这些结果表明，在新生儿下丘脑神经元中表达的COMT可能直接参与神经末端释放的儿茶酚胺的代谢。