抗NOR-90(hUBF)抗体が認識する自己抗原エピトープとその臨床的意義に関する研究

抗NOR-90（hUBF）抗体识别自身抗原表位的研究及其临床意义

基本信息

批准号：
06770343
负责人：
藤井隆夫
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Keio University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

ヒト胎盤およびヒト甲状腺癌由来のλgtll cDNAライブラリーより、抗NOR-90抗体陽性を確認したTT例の血清を用いてスクリーニングを行い、hUBFをコードする単一のクローンを得た。インサートcDNAは1.8および2.8kbの大きさを持ち、それぞれNOR1.8、NOR2.8と名付けた。NOR1.8発現産物を用いた免疫ブロット法で、教室の抗核小体抗体陽性91例をスクリーニングしたところ、9例(9.9%)が抗NOR-90抗体陽性であった。初診時高齢者が多く、一次性または二次性シェ-グレン症候群(SjS)が7例(78%)、肺線維症が5例(56%)、慢性関節リウマチ(RA)が4例(44%)と、従来から関連が報告されていた強皮症(3例、33%)より高頻度であった。全長cDNAであるNOR2.8を制限酵素で切断後、蛋白発現ベクターにサブクローニングし、抗NOR-90抗体陽性血清を用いたコロニーブロット法によりスクリーニングした。その結果異なる5つのcDNA断片が得られ、それらの発現産物と抗NOR-90抗体陽性血清9例との反応性を検討した。反応様式は多様で、hUBF上に少なくとも5つのエピトープが存在することが判明した。特にDNA結合部位とされるアミノ酸89〜221のA領域と、別の転写因子であるhSL1の結合部位であるアミノ酸388〜453のD領域に主要エピトープが含まれると考えられた。また全例がhUBF分子上に少なくとも2つのエピトープを有した。以上の結果は抗NOR-90抗体産生に関し、antigen drivenの仮説を支持するものである。さらにSjSまたはRA患者では、強皮症患者に認められなかったマイナ-エピトープ(B、C、E領域)との反応性が認められ、疾患によって反応性が異なる可能性が示唆された。

使用来自人类胎盘和人甲状腺癌衍生的λgtllcDNA文库获得了一个单一的编码HUBF，使用来自TT病例的血清，这些血清证实了抗NOR-90抗体阳性的抗体。插入式cDNA的尺寸为1.8和2.8 kb，分别命名为Nor1.8和Nor2.8。当使用NOR1.8表达产物的免疫印迹筛选91个教室阳性抗核酸抗体阳性病例时，抗NOR-90抗体为9（9.9％）为阳性。大多数患者在初次咨询时是老年人，其中7例（78％）的原发性或继发性SJS综合征（SJS），5例（56％）的肺纤维化，4例（44％）的类风湿关节炎（RA）（RA），以前据报道与Scleroderoderoderma（3案例）相关。在用限制酶切割全长cDNA NOR2.8后，将其亚克隆到蛋白质表达载体中，并使用抗NOR-90抗体阳性血清筛选斑点。结果，获得了五个不同的cDNA片段，并检查了其表达产物与9例抗NOR-90抗体阳性血清的反应性。反应模式是多种多样的，在HUBF上发现至少有五个表位。特别是，主要表位被认为包含在氨基酸89-221的A区域中，该区域被认为是DNA结合位点，而氨基酸的D区域388-453是HSL1的结合位点，是另一个转录因子。所有这些都在HUBF分子上至少有两个表位。以上结果支持有关抗NOR-90抗体产生的抗原驱动假设。此外，患有SJS或RA的患者与硬皮病患者未发现的次要表位（区域B，C，E）无反应，这表明反应性可能取决于疾病。