インスリン様成長因子(IGF)結合タンパク質-1遺伝子の転写制御機構の解析

胰岛素样生长因子（IGF）结合蛋白1基因转录调控机制分析

基本信息

批准号：
06760121
负责人：
竹中麻子
金额：
$ 0.64万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-06760121/
关键词：
タンパク質栄養 IGFBP-1 HNF-1

项目摘要

インスリン様成長因子結合タンパク質-1(IGFBP-1)は、その肝臓における転写速度およびmRNA量が食餌タンパク質の質や量の低下に伴って著増しており、体タンパク質の代謝制御において重要な役割をはたしていると考えられている因子である。本研究では、栄養状態の低下に伴ってBP-1遺伝子に生じる転写制御機構の変化を解明することを目的として、同遺伝子5′領域に結合するHNF-1(hepatocyte nuclear factor-1)に注目して解析を行った。HNF-1には同じ塩基配列を認識する2種類のサブタイプ(HNF-1α,β)が存在するため、まずIGFBP-1遺伝子に結合する因子の同定およびその栄養状態の変化に対する応答を調べてみた。タンパク質として12%カゼインを含む餌(C)あるいはタンパク質を含まない餌(PF)で飼育したラット肝臓より得た核タンパク質を用いて、IGFBP-1遺伝子の断片をプローブとしてgel shift assayを行ったところ、shiftするバンドの移動度が両群で異なっていた。さらに、この反応液にHNF-1α,βの抗体を加えたところ、いずれの場合にもHNF-1αの抗体のみが結合する因子と反応した。この現象は、プローブDNAとしてHNF-1の結合配列のオリゴヌクレオチドを用いた場合にも再現された。また、同様の系でDNasel footprintを行ったところ、PFの核タンパク質の方がCよりも7bp広い領域をprotectしていた。以上の結果より、タンパク質栄養状態の変化に応答して肝臓中のHNF-1αに何らかの変化が生じて、これがIGFBP-1遺伝子の転写制御に関与している可能性が強く示された。

胰岛素样生长因子结合蛋白-1（IGFBP-1）是一个被认为在人体蛋白质的代谢调节中起重要作用的因素，因为其转录率和肝脏中的mRNA含量随着饮食蛋白的质量和数量的下降而显着增加。在这项研究中，我们分析了与同一基因的5'区域结合的HNF-1（肝细胞核因子-1），目的是阐明BP-1基因中发生的转录调节机制的变化，因为营养状况下降。由于有两个亚型（HNF-1α，β）识别相同的核苷酸序列，因此我们首先检查了与IGFBP-1基因结合的因素及其对营养状态变化的响应的鉴定。使用以蛋白质或无蛋白质饮食（PF）为12％酪蛋白（C）获得的大鼠肝脏育种的核蛋白，使用IGFBP-1基因的片段作为探针进行凝胶转移测定法，两组中转移带的迁移率都不同。此外，当将HNF-1α和β的抗体添加到该反应溶液中时，在每种情况下，将反应与仅HNF-1α抗体结合的药物反应。当将HNF-1结合序列的寡核苷酸用作探针DNA时，也会再现这种现象。此外，当在类似的系统中进行DNASEL足迹时，PF核蛋白保护了大于C大的7bp区域。上述结果强烈表明，肝脏中HNF-1α发生某种变化，响应于蛋白质营养状态的变化，并且可能涉及IGFBP-1基因的转录调控。