ラットインスリン様成長因子I(IGF-I)遺伝子の転写制御機構の解析

大鼠胰岛素样生长因子I（IGF-I）基因转录调控机制分析

基本信息

批准号：
08760125
负责人：
竹中麻子
金额：
$ 0.58万
依托单位：
The University of Tokyo
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1996
资助国家：
日本
起止时间：
1996 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-08760125/
关键词：
IGF-I 転写因子 South western法 One Hybrid System

项目摘要

本研究では、体タンパク質代謝において重要なホルモンであるIGF-I遺伝子の転写制御機構を解明する目的で、すでに我々が検出に成功しているラット肝臓の核内因子(A〜J)の遺伝子のクローニングを、South western法およびOne Hybrid Systemの2種の方法を用いて行った。1)South western法 A〜Jの因子の結合配列のオリゴヌクレオチドを5〜12回タンデムに連結し(A^<tan>〜J^<tan>)、単独の場合より核内因子との結合活性が上昇していることを確認した。続いて、このA^<tan>〜J^<tan>の配列をプローブとしてラット肝臓cDNAの発現ライブラリーをスクリーニングし、A^<tan>〜J^<tan>の配列と結合する因子の検索を行った。2)One Hybrid System A^<tan>〜J^<tan>の配列をレポーター遺伝子(ヒスチジン合成酵素およびβ-ガラクトシダーゼ)の上流に連結した後、酵母のゲノムDNAに組み込み、レポーター遺伝子の発現のバックグラウンドが十分に低いことを確認した。この系を用いて、レポーター遺伝子の発現を指標としてエフェクター遺伝子(GAL4)の下流に挿入したラット肝臓cDNAライブラリーをスクリーニングし、A^<tan>〜J^<tan>の配列と結合する因子の検索を行った。現在One Hybrid Systemにより5つのクローンを取得しており、その塩基配列の決定を行っているところである。本研究では、IGF-I遺伝子の5'上流領域と結合してその転写を制御する新規の因子のcDNAが取得できる可能性が高く、IGF-Iの生体における多様な作用を考えるとその重要性は非常に大きい。

在这项研究中，为了阐明体内蛋白质代谢中重要激素IGF-I基因的转录控制机制，我们研究了已经成功检测到的大鼠肝核因子（A至J）基因。使用两种方法进行克隆：西南方法和单一混合系统。 1) Southwestern法将具有因子A至J结合序列的寡核苷酸串联连接5至12次（A^<tan>至J^<tan>），与使用时相比，增加与核因子的结合活性单独被证实正在上升。接下来，我们使用该 A^<tan>~J^<tan> 序列作为探针筛选大鼠肝脏 cDNA 表达文库，以寻找与我所做的 A^<tan>~J^<tan> 序列结合的因子。它。 2) 一个杂交系统A^<tan>~J^<tan>序列连接在报告基因（组氨酸合酶和β-半乳糖苷酶）上游，然后整合到酵母基因组DNA中以支持报告基因的表达我确保地面足够低。使用该系统，我们以报告基因的表达为指标，筛选了插入效应基因（GAL4）下游的大鼠肝脏cDNA文库，并检测了与A^<tan>至J^<tan>序列结合的因子我做了一个搜索。目前，利用One Hybrid System已经获得了5个克隆，并且正在确定它们的核苷酸序列。这项研究很有可能获得与 IGF-I 基因 5' 上游区域结合并控制其转录的新因子的 cDNA，考虑到 IGF-I 在生物体中的多种作用，其重要性很高。非常大。