歯周炎関連口腔細菌による炎症性シクロオキシゲナーゼ産生の解析

牙周炎相关口腔细菌产生炎性环氧合酶的分析

基本信息

批准号：
05771482
负责人：
佐々木実
金额：
$ 0.58万
依托单位：
Iwate Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Encouragement of Young Scientists (A)
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

歯周炎関連の口腔内細菌としてPorphylomonas gingivalis、Streptococcus anginosusの培養上清からヒト末梢血単核細胞(PBMC)を幼若化するマイトジェニックファクター(MF)を部分精製し、炎症性シクロオキシゲナーゼ(COX-2)mRNAの動態におよぼす影響をReverse transcriptase-polymerase chain reaction(RT-PCR)法で検討した。1.方法(1)MFの精製:P.gingivalis、S.anginosusの培養上清をDEAE-Sephacel、Sehadex G-100で分画し、部分精製した。これらの画分のうち、PBMCに対する幼若化能の強い画分をMFとして用いた。(2)COX-2 mRNAの検出:P.gingivalis、S.anginosusから得られたMFをPBMCあるいはヒト歯肉線維芽細胞(Gin-1)に加えて培養し、4時間後に細胞を集め、Acid guanidinium thiocyanate-phenolchloroform(AGPC)法で全RNAを抽出する。さらにこのRNAからcDNAを合成し、COX-2特異的プライマーを用いて、PCRを行い、アガロース電気泳動でCOX-2 mRNAを検出した。2.結果(1)P.gingivalis、S.anginosusの培養上清から得られたMFは、SDS-PAGEで3〜4本のタンパクバンドにまで精製した。(2)PBMCあるいはGin-1にこれらMFを(1〜2mug/ml)加えて培養すると、細胞内mRNAは対照(PBSコントロール)にくらべ、P.gingivalis、S.anginosusいずれのMFでも明らかにCOX-2 mRNAが増量していた。3.考察:以上の結果より、歯周炎関連細菌P.gingivalis、S.anginosusの培養上清にCOX-2を誘導する物質が存在し、歯周炎との関連が示唆された。

从牙周炎相关口腔细菌牙龈卟啉单胞菌和咽峡炎链球菌的培养上清液中部分纯化出使人外周血单核细胞（PBMC）恢复活力的促有丝分裂因子（MF），以及炎性环氧合酶（COX-2）。使用逆转录聚合酶链式反应（RT-PCR）方法。 1.方法(1)MF的纯化：使用DEAE-Sephacel和Sehadex G-100分级牙龈卟啉单胞菌和咽峡炎链球菌的培养上清液并部分纯化。在这些级分中，对PBMC具有强爆破能力的级分被用作MF。 (2)COX-2 mRNA的检测：将从牙龈卟啉单胞菌和咽峡炎链球菌获得的MF添加到PBMC或人牙龈成纤维细胞(Gin-1)中，培养4小时后，收集细胞并与酸胍一起孵育。使用硫氰酸盐-苯酚氯仿 (AGPC) 方法提取总 RNA。另外，由该RNA合成cDNA，使用COX-2特异性引物进行PCR，通过琼脂糖电泳检测COX-2 mRNA。 2.结果 (1)从牙龈卟啉单胞菌和咽峡炎沙门氏菌培养上清液中获得的MF通过SDS-PAGE纯化为3至4个蛋白条带。 (2)当PBMC或Gin-1与这些MF(1-2mug/ml)一起培养时，细胞内mRNA水平显着低于对照(PBS对照)，并且牙龈卟啉单胞菌和咽峡炎沙门氏菌MF均明显表现出COX -2 mRNA增加。 3.讨论：由上述结果可知，牙周炎相关菌P.gingivalis和S.anginosus的培养上清液中存在诱导COX-2的物质，提示与牙周炎的关系。