特定染色体導入によるがん抑制遺伝子の同定

通过引入特定染色体鉴定抑癌基因

• 批准号: 05152084
• 负责人: 押村 光雄
• 金额: $ 6.4万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Cancer Research
• 财政年份: 1993
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1993 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152084/
• 关键词: がん抑制遺伝子; 遺伝子導入; 増殖抑制; 転写調節; 軟寒天内増殖; マウスDT細胞; ヒトYL遺伝子; がん抑制遺伝子; 遺伝子導入; 増殖抑制; 転写調節; 軟寒天内増殖; マウスDT細胞; ヒトYL遺伝子

マウスDT細胞の軟寒天内増殖は正常ヒト1番染色体移入により抑制される。さらに,ヒト1番染色体移入DT細胞から希に出現する軟寒天内増殖クローンについて,ヒト1番染色体上の共通欠失領域の同定を行ったところ,1q21あるいは1q23-q25領域にこの抑制にかかわる遺伝子の存在が推定され,この領域から1つの候補遺伝子YLの単離に成功した。そこで,DT細胞の軟寒天内コロニー出現頻度を指標にして,遺伝子導入によるヒトYL遺伝子の抑制効果について検討した。サイトメガロウイルス発現ベクター(pRc/CMV)にYLcDNAをセンスあるいはアンチセンス方向に連結したプラスミド(pCMV-YL,pCMV-YLR)を作製し,それぞれDT細胞に導入した。導入細胞の軟寒天内増殖およびその発現等について検索した結果,pCMV-YL導入DT細胞(YL-DT)においてのみ軟寒定内コロニー出現頻度の低下が認められた。さらに,YL-DT細胞由来の軟寒天内増殖クローンの解析を行ったところ,neo遺伝子を含む発現プラスミドの消失,あるいは発現プラスミドを保持したままでのヒトYLcDNA発現の著しい低下が認められた。pCMV-YLR導入DT細胞(YLR-DT)由来の軟寒天内増殖クローンの解析では,導入した発現プラスミドの存在が確認された。これらのことから,ヒトYL遺伝子はDT細胞の軟寒天内増殖を抑制する効果をもつことが強く示唆された。他方,YLcDNAの予測されるアミノ酸配列は多くの転写因子にみられる特徴をもっており,大腸菌において産生させたYL蛋白には強いDNA結合能が認められたことからも,YL蛋白が他の遺伝子群の転写調節を介して機能している可能性が考えられ,標的遺伝子の同定等を含め今後の検討が期待される。

小鼠DT细胞的软琼脂生长被正常的人类染色体转移抑制。此外，在罕见的人染色体1引入DT细胞的情况下，鉴定了人类染色体1的常见缺失区域，并且在1q21或1q23-Q25区域中预测了参与该抑制的基因的存在，并且一个候选基因，YL，YL，YL，从该区域成功隔离。因此，我们利用DT细胞中软琼脂中菌落作为指数来研究人类YL基因的抑制作用。准备YlcDNA与质质病毒表达载体（PRC/CMV）相关的质粒（PCMV-AL，PCMV-ALRR），在含义或反义方向上均已链接，并引入每个DT细胞。在软琼脂及其表达等中寻找软琼脂的生长表明，仅在PCMV-基因转导的DT细胞（YL-DT）中降低了软冷菌落的发生频率。此外，对来自YL-DT细胞的软琼脂生长克隆的分析表明，含有NEO基因的表达质粒丢失了，或者在保留表达质粒的同时显着降低了人YLCDNA的表达。对源自PCMV-ylr-transdos DT细胞（YLR-DT）衍生的软琼脂 - agar增殖克隆的分析证实了引入的表达质粒的存在。这些结果强烈表明，人YL基因具有抑制DT细胞中软琼脂生长的作用。另一方面，YL cDNA的预测氨基酸序列在许多转录因子中都有特征，并且由于大肠杆菌中产生的YL蛋白具有很强的DNA结合能力，因此YL蛋白可能会通过其他基因的转录调节来起作用，并且预期未来的研究是可以预期的，包括靶基因的鉴定。