特定染色体導入によるがん抑制遺伝子の同定

通过引入特定染色体鉴定抑癌基因

基本信息

批准号：
04152080
负责人：
押村光雄
金额：
$ 6.4万
依托单位：
Tottori University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1992
资助国家：
日本
起止时间：
1992 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-04152080/
关键词：
がん抑制遺伝子染色体移入胃がん

项目摘要

高分化型胃がんにおいては1番、5番、17番染色体のLOHが認められる報告が散見されることから、がん抑制遺伝子の機能を明らかにする目的で、正常細胞由来の染色体を導入し、得られたクローンのin vitroにおける種々の細胞特性(細胞集団倍加時間)とヌードマウスにおける造腫瘍性の検索を行ってきた。1番染色体導入クローンはin vitro細胞特性に変化は認められなかったが、ヌードマウスの造腫瘍性の著しい低下が認められた。5番染色体導入クローンでは細胞集団倍加時間に変化は認められなかったが、細胞飽和密度と造腫瘍性の著しい低下が認められた。17番導入クローンについては、in vitro細胞特性および造腫瘍性にクローン間で著しく差が認められ、17番導入による共通の効果は認められなかった。5番染色体に抑制効果があることより、5番染色体上のAPC遺伝子変異の検索行なったところ、MKN28ではコドン1450のCGAがTGAに変化し、non-sense mutationおよび正常alleleの消失が認められた。5番染色体移入クローンでは3本の5番染色体が認められ、そのうち1本は染色体in situ hybridizationによりpSV2neoで標識した5番染色体であることを確認した。なおDNA解析によっても正常APD遺伝子の導入が確認された。MKN28の17番染色体上のp53は、コドン251のATCがCTCに変化する変異が認められた。17番染色体導入クローンはp53を含む短腕部位がすべてのクローンで欠失していた。5番染色体導入クローンで飽和密度の低下が認められたため、ラット3Y1細胞と同時に培養を行ったところ、5番染色体導入クローンにおいてのみコロニーの著しい低下が認められた。その他、子宮内膜がん細胞株においても同様の染色体導入実験を行ったが、1番及び18番染色体導入により細胞老化が認められた。以上の結果は、1番染色体、5番染色体および17番染色体上には異なる機能をもつがん抑制遺伝子が存在する事を示唆する。

在差异化的胃癌中，有许多关于染色体1、5和17的LOH的报道，因此为了阐明癌症抑制基因的功能，引入了源自正常细胞的染色体，并在裸体小鼠中搜索了多种细胞特性（细胞群体倍增时间）的植物和肿瘤。尽管在染色体转染的克隆中未观察到细胞性质中未观察到变化，但裸鼠的肿瘤症降低了显着降低。尽管在5号染色体的克隆中未观察到细胞种群加倍时间的变化，但细胞饱和度密度和肿瘤性的降低显着降低。 For the transducer clone No. 17, significant differences were observed between clones in vitro cell properties and tumorigenicity, and no common effect was observed from transducer No. 17. Because chromosome 5 has a suppressive effect, when searching for APC gene mutations on chromosome 5, the CGA at codon 1450 was changed to TGA in MKN28, and non-sense mutation and normal allele were found to be lost.在转移5号染色体的克隆中观察到三个染色体5染色体，其中一个被确认为5号染色体，通过原位杂交染色体标记为PSV2Neo。此外，DNA分析证实了正常APD基因的引入。观察到MKN28染色体17的p53突变，其中CORDON 251的ATC更改为CTC。转导的第17染色体的克隆具有一个短的臂位点，其中包含所有克隆中删除的P53。随着染色体5转导的克隆的饱和密度降低时，与大鼠3Y1细胞同时培养时，仅在5种染色体的克隆染色体中观察到菌落的显着降低。此外，在子宫内膜癌细胞系中进行了类似的染色体引入实验，但是当引入染色体1和18时，观察到细胞衰老。以上结果表明，染色体1、5和17上存在具有不同功能的癌症抑制基因。