染色体導入による転移抑制遺伝子の同定

通过染色体转移鉴定转移抑制基因

• 批准号: 06281244
• 负责人: 押村 光雄
• 金额: $ 16.26万
• 依托单位: Tottori University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
• 财政年份: 1996
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1996 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06281244/
• 关键词: がん転移; 転移抑制遺伝子; 微小核細胞融合; 染色体導入; マウスメラノーマ細胞; 微小核融合法; ヒト18番染色体; 微小核細胞融合法

我々は、未知の転移抑制に関わる遺伝子のマッピングとクローニングを行うために、Y染色体を除く全ての正常細胞由来の染色体を微小核細胞融合法を用いて、マウスメラノーマ高転移株(B16-F10)へ移入し、ヌードマウスにおける造腫瘍性およびin vitro増殖特性の変化に対して抑制効果を示さないマイクロセルハイブリッド(MH)クローン(3番、4番、6番、8番、12番、13番、18番、X染色体)を選別した。分離した23種類の異なったヒト染色体移入クローン、計230クローンは、染色体解析により移入染色体の確認を行った。完全な移入染色体が高率に認められたMHクローンを用いて、転移抑制染色体を同定するための一次スクリーニングとして、ヌードマウスにおける造腫瘍性およびin vitro増殖特性についての検索を行い、これらのがん形質に対して抑制効果を示さない染色体移入クローン(3番、4番、6番、8番、12番、13番、18番、X染色体)を選別した。さらに、これらの染色体移入クローンは、以下の2種類の方法により転移能を検索した。さらに、選別した染色体移入クローンの転移能の抑制効果を受精鶏卵への注入による胎児肝転移を指標にした受精鶏卵法およびマウスへの静脈内注入による肺転移を指標にした手法により検索した。受精鶏卵法は、受精鶏卵漿尿膜上の血管へ5×10^5個の細胞を移植後、embryoの肝臓への転移結節を観察する。親細胞においては肝臓への平均転移結節数が74.6個で、その他の臓器(心臓、胃など)にも多数の転移結節が認められた。一方、18番染色体移入クローン(#18-1,9)においては、肝臓および他臓器に対して著しい転移結節数の減少が認められ、平均転移結節数は3.1および7.9であり、統計的に有意差が認められた(P<0.05)。他の3番、4番、6番、8番、12番、13番、X染色体移入クローンにおいては、親細胞と同様に高い転移能を示した。これらのことより、18番染色体上に転移抑制に係わる遺伝子の存在が示唆された。一方、マウスへの静脈内注入による肺転移を指標にした手法においては、3番、8番染色体移入クローンに、顕著な転移形成の低下が認められた。以上の結果から、(1)3番、8番染色体上にも転移抑制遺伝子が存在し、(2)受精鶏卵法での結果との相関を示さなかったことより、異なる転移能検索法を用いることが、複数の転移抑制遺伝子の検索に有効であることが示唆された。

To map and cloning unknown genes involved in metastatic suppression, we transferred chromosomes from all normal cells except the Y chromosome into mouse melanoma hypermetastatic strains (B16-F10) using micronuclear cell fusion method, and selected microcell hybrid (MH) clones (3, 4, 6, 8, 12, 13, 18, X chromosomes) that did not exhibit inhibitory effects on tumorigenicity and裸鼠体外增殖特性的变化。通过染色体分析证实了23种不同的人类染色体引入的克隆，总计230个克隆。使用较高的完全转染染色体速率的MH克隆用于鉴定转移抑制性染色体，并在裸鼠中寻找肿瘤性和体外增殖特征，而染色体转移克隆（3、4、6、6、8、8、12、12、13、18，x）未对这些抑制作用效果这些抑制作用。此外，通过以下两种方法搜索了这些染色体转移克隆的转移潜力：此外，使用胎儿肝转移的胎儿转移，使用胎儿肝转移使用鼻内注射，使用遗传性注射剂，使用胎儿转移，使用胎儿转移，使用遗传注射剂使用遗传剂，使用遗产的卵巢蛋白分泌症来搜索所选的染色体吸引引入的克隆的抑制作用。受精的鸡蛋法涉及将5×10^5细胞移植到绒毛膜上的血管中，并观察胚胎的转移结节向肝脏。在父母细胞中，肝脏的平均点头数为74.6，在其他器官（心脏，胃等）中发现了许多点头。另一方面，在染色体转移克隆编号18（＃18-1,9）中，肝脏和其他器官的转移性结节数量显着减少，转移性结节的平均数量为3.1和7.9，具有统计学上的显着差异（p <0.05）。其他染色体转移克隆3、4、6、8、12、13和X转移克隆的转移电位很高，类似于亲本细胞的转移电位。这些结果表明，存在于抑制第18染色体上转移的基因。另一方面，使用静脉注射小鼠引起的肺转移作为指示剂，染色体3和8表明转移形成显着下降。以上结果表明（1）在染色体3和8上也有转移抑制基因，（2）与受精鸡蛋法的结果无关，这表明使用不同的转移能力搜索有效地搜索用于搜索多种转移抑制剂基因。

项目成果

Tanaka,K.: "Suppression of tumorigenicity in human colon carcinoma cells by introduction of normal chromosome 1p36 region." Oncogene.8. 2253-2258 (1993)

Tanaka,K.：“通过引入正常染色体 1p36 区域抑制人类结肠癌细胞的致瘤性。”

Fujiwara,Y.: "A3-Mb physical map of the chromosome region 8q21.3-p22,including a 600-kb region commonly deleted in human hepatocellular carcinoma,colorectal cancer,and non-small cell lung cancer." Gene,Chr.,and Cancer. 10. 7-14 (1994)

Fujiwara, Y.：“染色体区域 8q21.3-p22 的 A3-Mb 物理图谱，包括人类肝细胞癌、结直肠癌和非小细胞肺癌中常见缺失的 600 kb 区域。”

Satoh,H.: "Suppression of tumorigenicity of A549 lung adenocarcinoma cells by human chromosomes 3 and 11 introduced via microcell-mediated chromosome transfer." Mol.Carcinogen.7. 157-164 (1993)

Satoh, H.：“通过微细胞介导的染色体转移引入人类 3 号和 11 号染色体，抑制 A549 肺腺癌细胞的致瘤性。”

Horikawa,I et al.: "A normal human chromosome 3 suppresses tumoriginicity of human cervical carcinoma cell line,SiHa" Chromosome Information Service. 58. 4 (1995)

Horikawa,I 等人：“正常人 3 号染色体抑制人宫颈癌细胞系 SiHa 的致瘤性”染色体信息服务。

Horikawa,I.et al.: "Subchromosomal mapping of a putative transformation suppressor gene on human chromosome 1" Jpn.J.Cancer Res.86. 444-450 (1995)

Horikawa,I.et al.：“人类 1 号染色体上假定的转化抑制基因的亚染色体作图”Jpn.J.Cancer Res.86。