遺伝子強制発現に対する哺乳動物細胞の防御機構の解明

阐明哺乳动物细胞针对强制基因表达的防御机制

基本信息

批准号：
21659054
负责人：
村岡正敏
金额：
$ 1.92万
依托单位：
Tokyo Metropolitan Organization for Medical Research
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Challenging Exploratory Research
财政年份：
2009
资助国家：
日本
起止时间：
2009 至 2010
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-21659054/
关键词：
遺伝子導入強制発現細胞増殖細胞死増殖抑制免疫沈降 EGFP 培養細胞

项目摘要

GeneSwitch system (invitrogen)という発現誘導系のシステムをマウス筋芽細胞(C2C12)に導入し、stable cell lineを樹立したところ、そのシステムで発現させた3種類全ての遺伝子において発現誘導を強くするに従い、細胞増殖が遅くなる、あるいは細胞死が起きることを見いだした。このことから、遺伝子の強制発現において発現量が多くなることにより、細胞がなんらかの防御作用を発現することが考えられた。そこで、GeneSwitchとは異なる発現誘導系のRTRV system (BBRC, 234, 769-773, 1997)を用いて同様の遺伝子の強制発現と細胞増殖の関係を検討した。この場合、遺伝子の発現量による細胞増殖の変化はみとめられなかった。従って、この現象は、GeneSwitch system固有の問題であることが考えられた。一方、RTRV systemを用いて、EGFPをC2C12細胞に導入しstable cell lineを樹立した。発現誘導をかける前のベーサルなEGFPの発現を指標に、sortingにより細胞を選別した場合、ベーサルな発現量が多い細胞は発現誘導をかける前の段階で、細胞死に至ることが多い傾向がみとめられた。ベーサルな発現量が少ない細胞に発現誘導をかけ、細胞死に至った細胞のベーサルなEGFP発現量と同等の発現をさせた場合、細胞死にいたる傾向はみとめられなかった。このことから外来の遺伝子が内在のゲノムのはいる位置によって、細胞死をおこすメカニズムが働くか否かが決定されることが示唆された。

将一个称为Geneswitch系统（Invitrogen）的表达诱导剂系统引入到小鼠成肌细胞中（C2C12），并建立了稳定的细胞系。发现系统在系统中表达的所有三个基因中增加了表达诱导的增加，因此发现该系统会慢慢增殖或引起细胞死亡。这表明由于基因强迫表达的表达增加，该细胞可以表现出一些保护作用。因此，我们使用RTRV系统（BBRC，234，769-773，1997）研究了相似基因的强迫表达与细胞增殖之间的关系，该系统是与Geneswitch诱导的一种不同表达系统。在这种情况下，未观察到由于基因表达水平引起的细胞增殖变化。因此，这种现象被认为是基因开关系统所特有的一个问题。同时，使用RTRV系统将EGFP引入C2C12细胞中以建立稳定的细胞系。当使用在表达诱导前使用基础EGFP表达进行分选进行分选细胞时，基础表达水平高的细胞经常在表达诱导之前经常导致细胞死亡的趋势。当诱导表达诱导基础表达水平低的细胞表达，并且表达等于导致细胞死亡的细胞的基础EGFP表达水平时，未观察到细胞死亡的趋势。这表明外源基因所在的基因组的位置决定了导致细胞死亡的机制是否有效。