血管内皮増殖抑制遺伝子導入型再狭窄予防ステントの開発

开发引入抑制血管内皮增殖基因的再狭窄预防支架

基本信息

批准号：
13877224
负责人：
定藤章代
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kyoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Exploratory Research
财政年份：
2001
资助国家：
日本
起止时间：
2001 至 2003
项目状态：
已结题

项目摘要

従来endothelial progenitor cell(以下EPCs)はヒト末梢血から単離されていたが、大量の血液が必要(200-300mL)で継続的な採取が困難、細胞表面抗原での分離が必要で手順が煩雑、増殖能が乏しいなどの問題点があり、多彩な動物実験への応用に限界があった。本研究ではそれらの問題点を以下の方法で克服した、すなわち(1)末梢血ではなく骨髄細胞より培養(2)表面抗原での分離なしに骨髄細胞をEPCsのみが増殖するような特殊な条件下で培養(3)全身麻酔下にrat大腿骨より骨髄を摘出する方法を考案。以上の3点によって得られた利点としては、(1)骨髄細胞を利用することで必要量が減少しかつ増殖が容易となったためratやmouseのEPCsを用いての実験が可能となった(2)手順が簡略化されまた表面抗原で選別をかけたものよりも増殖能が高かった(3)従来はヒト末梢血由来EPCsを利用して動物実験を行なっていたため免疫抑制剤の使用が必須であったが、本法を用いex vivoでのEPCs培養を可能としたため、より臨床に近い方法での移植、すなわち自家移植への道を開くことができた。(1)は他の論文でも同様の方法が提示されていたが、(2)に関して従来は機能的評価(アセチル化LDL取込み能およびレクチン染色)、免疫染色(von Willebrand factor)のみがなされていたが、本研究で初めてimmunoblotting法(Tie-2,Flk-1,vWFなど)を用いて蛋白レベルでの緻密な評価を行なった。また(3)は同様の方法を用いての論文は報告されておらず、本研究の独自の方法である。現在行なっていることは、(1)ratのcarotid balloon injury modelを一定の精度で作成できるようにtrainingおよび手技を検討、(2)同方法で得ることができたEPCsの投与経路(経動脈、経静脈、局所投与)での集積率の差を評価、の2つである。その後、動物での再狭窄予防効果を検討する。

尽管内皮祖细胞（以下称为EPC）已从人的外周血中分离出来，但存在诸如所需的大量血液（200-300 mL）和连续收集的困难，需要与细胞表面抗原，复杂的程序和较差的增殖能力以及在其应用程序范围内的限制，需要与细胞表面抗原分离，并且具有限制。这项研究通过以下方法克服了这些问题：（1）培养的骨髓细胞而不是外周血，（2）在特殊条件下培养的骨髓细胞，以便只有EPC在一般麻醉下只能与表面抗原分离而无需与表面抗原分离而不会与表面抗原分离。以上三点获得的优点是（1）使用骨髓细胞减少了所需的量和促进的增殖，因此可以使用大鼠和小鼠EPC进行实验，从而简化该过程，其增殖能力被简化，其增殖能力更高，并且使用表面抗原选择的方法高于使用人类的epc，但使用人类的epc epcs，使用了经常的方法来实施这种方法，但使用了epc epc，但使用了epc epc，但使用了人类的血液源，但使用了epc epc，是在使用人类的peripers sreders sreders sreters sreters sreters sreters sreters sreters epc， EPCS epcs ex vivo，它以更临床的方式（即自体移植）为移植开辟了道路。尽管在（1）的其他论文中介绍了相同的方法，但在过去，仅进行了功能评估（乙酰化的LDL摄取能力和凝集素染色）和免疫染色（von willebrand因子），但是在本研究中，第一次使用Immuno plie clie clie flk（fie flk）进行了蛋白质水平上的详细评估（von willebrand系列）。此外，在（3）中尚无使用相同方法的论文，这是本研究的独特方法。我们目前正在做的是（1）检查训练和技术，以一定程度的准确性创建大鼠的颈动脉球囊损伤模型，以及（2）评估可以使用相同方法获得的EPCS（动脉，静脉，静脉，地方管理）中累积率的差异。之后，我们将检查预防动物再狭窄的作用。