アデノウイルス遺伝子と相互作用する宿主細胞因子

与腺病毒基因相互作用的宿主细胞因子

基本信息

批准号：
05152045
负责人：
永田恭介
金额：
$ 1.41万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Cancer Research
财政年份：
1993
资助国家：
日本
起止时间：
1993 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-05152045/
关键词：
アデノウイルス遺伝子複製遺伝子転写宿主細胞因子無細胞質

项目摘要

我々はモデルがんウイルスとしてアデノウイルスをとりあげ、その増殖過程のうち遺伝子の複製段階と細胞がん化に関連した初期遺伝子の転写段階に焦点をあて、分子レベルでそれらの機構を明らかにするとともに、これらの段階に関与する宿主細胞由来の因子群の性状と細胞内機能を明かにすることを目的として研究を遂行した。感染細胞内における真の複製鋳型はウイルスDNAとコアタンパク質の複合体である。この複合体を鋳型として、裸のゲノムの複製に必須な5種類のタンパク質因子の存在下に試験管内相補試験で複合体の複製に必要な因子を精製し、Template Activating Factor-l(TAF-l)と命名した。TAF-lは複製の開始反応を促進するとともに、DNA鎖の伸長反応に必須であった。その部分アミノ酸配列を決定し、cDNAをクローン化した。今後、cDNAの全塩基配列を決定し、機能ドメインの同定を行なう必要がある。初期遺伝子の転写にかかわる因子のうち、E4TF1はすでにcDNAのクローン化に成功しており、etsドメインとnotchドメインをそれぞれ含む2つのサブユニットから構成されていることが示されている。本研究での大腸菌で発現したそれらの変異体を用いた解析から、転写活性化機能をもつものはE4TF1を構成する2種のサブユニットの4量体であることが明かとなった。初期遺伝子の転写にかかわる別の因子であるE4TF3の活性はE1A遺伝子産物や他の分子との相互作用、あるいは自身の修飾によって調節される。本研究によりE4TF3に強く相互作用する分子の中にはそれ自身をリン酸化する酵素が含まれており、このリン酸化酵素による修飾がE4TF3の活性を調節している可能性が示された。E4TF1およびE4TF3についてはそれらの細胞内における活性調節機構、とくに修飾による機構について解析をすすめる必要がある。

我们将腺病毒作为癌症病毒进行了腺病毒，并进行了研究，目的是阐明腺病毒作为模型癌症病毒的机制，重点是基因复制阶段和与细胞癌变相关的早期基因的转录阶段，并揭示了它们在分子水平上的机制，并揭示了构成群体的机构，并揭示了构成群体的功能。感染细胞中的真实复制模板是病毒DNA和核心蛋白的复合物。使用该复合物作为模板，在存在五个蛋白质因子的情况下，通过体外补体测试纯化了复杂复制所需的因子，这对于复制裸基因组至关重要，并被命名为模板激活因子L（TAF-L）。 TAF-L促进了复制的起始反应，对于DNA链的延伸反应至关重要。确定部分氨基酸序列并克隆cDNA。将来，有必要确定cDNA的整个碱基序列并确定功能域。在早期基因转录涉及的因素中，E4TF1已经成功克隆了cDNA，并被证明由两个包含ETS域和缺口结构域的亚基组成。在这项研究中，使用大肠杆菌中表达的这些突变体的分析表明，具有转录激活函数的人是组成E4TF1的两个亚基的四聚体。 E4TF3的活性是早期基因转录的另一个因素，受到与E1a基因产物和其他分子的相互作用或通过其自身修饰的相互作用。这项研究表明，与E4TF3强烈相互作用的分子包括磷酸化自身的酶，并且通过这种磷酸化酶进行修饰可能调节E4TF3的活性。对于E4TF1和E4TF3，有必要进一步分析其细胞内的活性调节机制，尤其是通过修饰的机制。