ウイルスクロマチンの複製と転写を制御する因子の生理機能と機能構造の解析

病毒染色质复制和转录控制因子的生理功能和功能结构分析

基本信息

批准号：
09256206
负责人：
永田恭介
金额：
$ 28.16万
依托单位：
Tokyo Institute of Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
财政年份：
1997
资助国家：
日本
起止时间：
1997 至 1999
项目状态：
已结题

项目摘要

アデノウイルスクロマチンを用いたクロマチン構造変換(クロマチンリモテリング)活性の測定系を用いて、細胞由来のクロマチンリモデリング因子TAF(Template Activating Factor)-I、-II、-IIIを同定した。同調した細胞を用いて、TAF-Iはクロマチンの凝集が起こるM期で不活性型に変わっていること、また不活性型への変換とTAF-Iのリン酸化が同時に見られることが明かとなった。M期細胞抽出液とATPで処理してリン酸化されたTAF-Iは活性を失ったことから、TAF-Iの活性調節にはM期特異的なキナーゼが関わっていると考えられた。TAF-Iは、ある種の急性骨髄性白血病でその遺伝子が染色体の転座点に見いだされる因子であった。融合遺伝子から由来する融合タンパク質TAF-I-CANは、TAF-Iおよび核孔タンパク質としてのCANの機能の一部を保持していたが、核や核膜上のみならず一部は細胞質にも存在していた。従って、融合タンパク質がそれを構成するそれぞれのパーツが本来存在する以外の場所にも局在する事実はがん化機能を考えるうえで重要と考えられる。TAF-IIはヌクレオソームの集合に関る因子として同定されていたNAP-I(Nucleosome Assembly Protein-I)と同一であった。TAF-IIIも、その構造解析から、やはりある種の白血病でその遺伝子が染色体の転座点に見いだされている因子であることが判明した。

使用腺病毒染色质的系统测量染色质结构转换（染色质服及场）活性，鉴定了细胞来源的染色质重塑因子-i，-ii和-iiII。使用同步细胞，可以同时看到TAF-I在M相变为染色质聚集的M相变为非活性形式，并且可以同时看到TAF-I的非活性形式和磷酸化的转化。由于TAF-I通过M相细胞提取物和ATP的治疗磷酸化，因此人们认为M期特异性激酶参与调节TAF-I活性。 TAF-I是某些急性髓样白血病的因素，即该基因在染色体易位点发现。源自融合基因的融合蛋白TAF-I-CAN保留了CAN的一部分作为TAF-I和核孔蛋白，但它不仅存在于细胞核和核膜中，还存在于细胞质中。因此，融合蛋白在最初存在的每个部分以外的地方都位于其他地方，这一事实在考虑癌症形成功能时很重要。 TAF-II与NAP-I（核小体组装蛋白I-I）相同，后者已被鉴定为涉及核小体组装的因素。结构分析还表明，TAF-III也是某些白血病中发现的因素，在染色体的易位点也发现了TAF-III。