造血幹細胞の分化増殖における抑制因子と増殖因子間の遺伝子発現制御機構

造血干细胞分化增殖过程中抑制因子和生长因子的基因表达调控机制

基本信息

批准号：
03670127
负责人：
野見山尚之
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1991
资助国家：
日本
起止时间：
1991 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-03670127/
关键词：
サイトカイン LD78 炎症細胞増殖発現調節 GMーCSF 転写因子 Ihー3

项目摘要

ヒト・サイトカインLD78はIL‐8等を含む細胞増殖や炎症に関与したス-パ-ファミリ-の一員である。我々はLD78の3種の遺伝子を単離し、その構造を明らかにしているが、この内の一つα遺伝子のプロモ-タ-中の発現誘導を抑制する領域(ICK‐1)について白血病細胞株K562及びJurkatを用いて解析した。まずsite‐directedmutantsを用いた解析により、この領域にはpositive及びnegativeに働く2つの転写因子がオ-バ-ラップして結合することを見い出した。ゲルシフトアッセイでのコンペティション実験により、positiveに働く因子はGM‐CSF遺伝子プロモ-タ-中のCLEO領域に結合する因子と同じものと考えられ、またnegativeに働く因子はIL‐3遺伝子プロモ-タ中の発現を阻害する配列に結合する因子NIPと同一のものと考えられた。また両因子ともα遺伝子プロモ-タ-のICK‐1領域に対してのアフィニティ-は低かったが、少なくともpositiveな因子は発現誘導に重要な役割をしていた。次にゲルシフトアッセイやDNaselフットプリンティングによりタイムコ-スを調べると、両因子とも刺激前及び刺激後でも存在し、移動度や量的に顕著な変化はなかった。しかしこのICK‐1領域のオリゴマ-を用いた解析から、このpositiveに働く因くは無刺激後では活性はなく、刺激後に何らかの修飾を受けるものと考えられた。またnegativeな因子はpositiveな因子の結合を拮抗的に阻害するだけではなく、他の部位に結合するpositiveな因子の活性をも阻害することが示唆された。以上の結果から、これら両因子の量比によってLD78 mRNAのレベルがコントロ-ルされていると考えられた。

人类细胞因子LD78是参与细胞增殖和炎症的超级家族的成员，包括IL-8等。我们分离了LD78的三个基因，并揭示了它们的结构，并使用白血病细胞系K562和Jurkat分析了这些α基因之一的启动子中表达诱导的区域（ICK-1）。首先，使用定位突变体的分析表明，在该区域作用阳性和负面作用的两个转录因子被覆盖并结合。凝胶转移测定中的竞争实验表明，积极作用因子与与GM-CSF基因启动子中CLEO区域结合的因素相同，而负作用因子与因子NIP相同，该因子与抑制IL-3基因启动子中表达的序列结合。尽管这两个因素对α基因启动子的ICK-1区域的亲和力也很低，但至少积极因素在诱导表达中起重要作用。接下来，当通过凝胶移位测定和DNASEL足迹检查时间过程时，这两个因素都存在于刺激之前和之后，并且迁移率或定量价值没有显着变化。但是，从使用该ICK-1区域的低聚物的分析来看，人们认为这种积极作用的原因是它在没有刺激后没有活性，并且在刺激后进行了一些修饰。还有人提出，负因素不仅拮抗阳性因素的结合，而且抑制了与其他位点结合的阳性因素的活性。从以上结果来看，人们认为LD78 mRNA的水平受这些因素的数量比率控制。