LD78遺伝子による細胞死とCCR5の発現低下が病気進行へ与える影響の解析

LD78基因引起的细胞死亡和CCR5表达降低对疾病进展的影响分析

• 批准号: 11161219
• 负责人: 小原 健志
• 金额: $ 1.34万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1999
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1999 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-11161219/
• 关键词: LD78; ケモカイン; HIV-1; CCR5; 変異体; CD26; dipeptidyl peptidase IV; MIP-1α

H10年度の本研究によりヒトLD78/MIP-1α遺伝子群は、極めて大きな多様性がある。N-末端のアミノ酸配列を基にLD78A群とLD78B群に分類した場合、RFLP解析によりHIV-1感染・長期非進行者ではLD78B群が多く、進行者でLD78A群が多いことが明らかになった。そこでH11年度では、LD78A群とLD78B群の生物学的解析を行ったところ、LD78A群とLD78B群では、ウイルスへの影響およびCCR5のdown-regulationにおいて大きな差が見い出された。この原因は、N-末端の第二アミノ酸残基の差による事が明らかになった。また、他のケモカインにおいてCD26(リンパ球、マクロファージの細胞表面に発現され、N末端から二番目のアミノ酸残基がプロリンまたはアラニンである場合、N末端の二個のペプチドを切断する活性をを持っている。Dipeptidyl Peptidase IVとも呼ばれる。)による切断により活性の差が見い出されている。LD78Bでは、このCD26により二回切断される構造をもっている。N-末端が切断された構造をもつLD78B蛋白を大腸菌で発現させ解析した。一回切断では、活性の大きな低下は認められなかったが、二回切断により活性が大きく低下した。このことは、LD78B蛋白もCD26による調節を受けている可能性を示唆した。更に、LD78BのN末端の生物学的活性を解析するためにCCモチーフまで2アミノ酸残基ずつalanine(A)残基に置換した変異体を6個作成しその生物学的活性を調べた。2番目のプロリン残基及び7番目のThr残基から9番目の残基までがCCR5 down-regulationおよび抗ウイルス活性の低下が認められこの部分が重要である事が示唆された。

这项在2008年的研究显示了人类LD78/MIP-1α基因的极其多样化。当该组根据N末端的氨基酸序列分类为LD78A和LD78B组时，RFLP分析表明，该组在HIV-1感染或长期不突出中更有可能是LD78B，并且该组在该组中更可能是LD78A。因此，在2009年，对LD78A和LD78B组进行了生物学分析，并发现了对病毒的影响和LD78A和LD78B组之间CCR5的影响显着差异。已经揭示了原因是由于N末端的次生氨基酸残基的差异。此外，当CD26裂解的活性差异（在淋巴细胞和巨噬细胞的细胞表面表达时，当N-末端第二个氨基酸残基是脯氨酸或丙氨酸时，它具有在N-terminus上切割两个肽的活性。 LD78B的结构被此CD26切割了两次。 LD78B蛋白具有带有N末端的结构，在大肠杆菌中表达并进行了分析。单个切割后的活动没有显着降低，但是两倍的裂解导致活性显着下降。这表明LD78B蛋白也可能受CD26调节。此外，为了分析LD78B N末端的生物学活性，创建了六个突变体，其中将两个氨基酸残基被丙氨酸（a）残基取代到CC基序，并检查了这些突变体的生物学活性。第二个脯氨酸残基和与第九个残基的第七次THR残基显示CCR5下调和抗病毒活性的降低，这表明该部分很重要。