HIV-1感染者における新しいLD78遺伝子ファミリーの部分欠損の解析

HIV-1感染者LD78基因家族新的部分缺失分析

• 批准号: 10180220
• 负责人: 小原 健志
• 金额: $ 1.47万
• 依托单位: Kumamoto University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas (A)
• 财政年份: 1998
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 1998 至 无数据
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-10180220/
• 关键词: HIV-1; ケモカイン; LD78

ヒト末梢血単球より抽出したDNAを用い、LD78遺伝子(2264BP)をPCRにより増幅し、TAクローニングベクターを用いてサブクローニングしMsp1などの制限酵素で分類し、塩基配列を全て決定したところ、LD78遺伝子ファミリーの遺伝子は10個以上の遺伝子群でありLD78遺伝子と93%から98%の相同性を持つことが明かになった。93アミノ酸残基中21、22、25、62、70番目のアミノ酸残基が異なることが明らかになった。21番目と22番目のアミノ酸残基をもとにLD78-A群及びLD78-B群に分類した。21番目と22番目のアミノ酸残基をコードする部位にAvaII及びScrFIを制限酵素切断部位がLD78-Bでは存在するがLD78Aでは存在しないことを利用して、PCR-RFLPを用いて相対的量を算出した。進行者では、LD78-B群が優位であり、長期非進行者では、LD78-A群が優位であることが明らかになった。LD78-A群、LD78-B群の蛋白を酵母で発現させ機能を比較したところ、LD78-B群は、LD78-A群の蛋白より、抗ウイルス活性が強いことが明らかになった。また、CCR5をdown-regulationする作用も約20倍強いことが明らかになった。一方では、IL-1,TNF-aを誘導する作用があり、炎症誘導とHIV-1複製抑制という相反する性質をもつ、LD78-B群の増幅は、むしろ炎症誘導に伴う有害な影響が強く出ていると思われる。

使用从人外周血单核细胞中提取的DNA，通过PCR扩增LD78基因（2264bp），使用TA克隆载体亚克隆，通过限制酶（例如MSP1）进行分类，并确定整个碱基序列。据表明，LD78基因家族中的基因是10个或更多基因的组，与LD78基因具有93％至98％的同源性。据显示，在93个氨基酸残基中，位置21、22、25、62和70位的氨基酸残基有所不同。位置21和22处的氨基酸残基分为LD78-A和LD78-B组。使用PCR-RFLP，使用PCR-RFLP计算了相对量，利用了限制酶裂解位点存在于LD78-B中，但在LD78A中不存在于21日和22日的氨基酸残基的LD78A中。发现LD78-B组在启动子中占主导地位，而LD78-A组在长期非培训中占主导地位。当来自LD78-A和LD78-B的蛋白质在酵母中表达并比较其功能时，发现LD78-B组具有比LD78-A组的蛋白质更强的抗病毒活性。还揭示了CCR5的下调效应约20倍。另一方面，LD78-B组的扩增具有诱导IL-1和TNF-A的作用，并且具有诱导炎症和抑制HIV-1复制的相反特性，似乎具有与诱导炎症的强大有害作用。

项目成果

小原健志: "ケモカインおよびケモカインレセプターと病状の進行" Practical Hematology. 8・7. 65-69 (1998)

Kenji Ohara：“趋化因子、趋化因子受体和疾病进展”《实用血液学》8・7（1998）。