Simian viras40ウィルスエンハンサーの活性調節機構

Simian viras40病毒增强子活性调控机制

基本信息

批准号：
63620513
负责人：
野見山尚之
金额：
$ 1.02万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1988
资助国家：
日本
起止时间：
1988 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-63620513/
关键词：
エンハンサー SV40 転写調節

项目摘要

多くの細胞種で働くSimian viras40(SV40)のエンハンサーは、少くとも8個の構成要素(モティフ)からなり、それぞれのモティフに特異的なtras-acting factorが結合して、エンハンサー活性を媒介している。このSV40エンハンサーの活性調節機構を明らかにすることを目的に、それぞれのモティフの細胞特異性及びモティフ間の協調作用を調べた。まずSV40エンハンサー全体にわたる3塩基連続したmutantを用いて、それぞれのモティフのエンハンサー活性に体する寄与を、ヒトHeha細胞、マウスplasmacyfoma細胞、未分化及びレチノイン酸で分化誘導処理したマウスembryonal carcinona細胞F9中で調べた。その結果、あるモティフの特定の細胞中での活性は、invitroで調べられた、そのモティフに選択的に結合する因子が存在するか否かとよく相関していた。次に、SV40エンハンサーのモティフ(GTII-C、GT-I、Sph-II、Sph-I、octamer)のオリゴマーを作成し、それらのエンハンサーとしての活性を、上記4種の細胞中で調べた。その結果、これら合成したエンハンサーの細胞特異性はそれぞれのモティフの細胞特異性と一致した。また、これらモティフは、(1)モティフの近接したtanclem repeatをオリゴマーとすればエンハンサーとしての活性をもつもの(GT-IIC、Sph)、(2)モティフの近接したtanclem repeatをオリゴマーとしてもエンハンサーとしての活性はないが、他のモティフと協調的に作用して活性をもつもの(GT-I)、(3)モティフの1コピーをオリゴマーにしただけでエンハンサーとしての活性をもつもの(octamer)、の3つのタイプに分類された。薬用冷蔵ショーケースは細胞培地保存に用いた。

在许多细胞类型中起作用的Simian ViRAS40（SV40）的增强子由至少八个成分（基序）组成，每个组件（基序）结合了针对每个基序的TRAS活性因子，从而介导增强子活性。为了阐明活性调节该SV40增强剂的机制，我们研究了每个基序的细胞特异性以及基序之间的协调性。首先，使用在SV40增强子中的三个连续突变体，每个基序对增强子活性的贡献在人的Heha细胞，小鼠浆细胞细胞，未分化和小鼠胚胎癌细胞F9中进行了用视网膜酸诱导的分化处理。结果，特定细胞中基序的活性与是否有在体外检查的因素与基序有选择性结合。接下来，制备了SV40增强子（GTII-C，GT-I，SPH-II，SPH-I，Octamer）的低聚物，并在上述四个细胞中检查了它们作为增强子的活性。结果，这些合成的增强子的细胞特异性与每个基序的细胞特异性一致。这些基序还分为三种类型：（1）如果最接近基序的tanclem重复重复是寡聚物，则tanclem重复具有增强剂（GT-iic，sph）的活性（gt-i），（3）如果隆重重复是低聚物，则八聚体是一种仅仅是低聚物的活性。药冷藏的展示箱用于存储细胞培养基。