細胞増殖を制御するケモカイン・ファミリーの分子生物学的研究

控制细胞增殖的趋化因子家族的分子生物学研究

基本信息

批准号：
06281249
负责人：
野見山尚之
金额：
$ 1.34万
依托单位：
Kumamoto University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
1994
资助国家：
日本
起止时间：
1994 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-06281249/
关键词：
ケモカインサイトカイン YAC 造血幹細胞ヒト染色体17番 LD78

项目摘要

【CCケモカイン遺伝子クラスター】 CEPH mega-YACライブラリーからヒトCCケモカイン遺伝子クラスターを含む約30クローンを同定し、一つのコンティグを作成した。このクラスターは数Mbにわたると考えられ、CCケモカイン8種の遺伝子の染色体17番q11上の配列順序が判明した。またCCケモカイン遺伝子クラスターはLD78α,LD78β,AT744.1,AT744.2,RANTESのグループとI-309,MCP-1,MCP-3のグループが、ケモカインメンバーの見出されていない領域を挟んで存在していた。またこのコンティグにはD17S933が含まれ、周囲には神経線維腫症遺伝子NF1および乳ガン遺伝子BRCA1が存在していた。次に単離したYACクローンのうちの3種を用いてこれらにハイブリダイズするヒト脳cDNAのクローニングを試みた。既知のあるいはそれに相同なcDNAは単離されているが、ケモカインのcDNAはまだ見いだしていない。【ヒト中枢神経系、骨髄好酸球前駆体および骨芽細胞でのCCケモカインLD78の構成的発現】 RT-PCR法で調べるとヒト脳でCCケモカインのLD78などが検出された。そこでヒトの脳12切片を抗LD78モノクローナル抗体を用いて免疫組織染色法で調べるといずれのサンプルでも神経細胞やアストロサイトと思われるグリア細胞が染色された。また以前に免疫組織染色法で骨髄中の好酸球前駆体がLD78を産生していることを見いだしていたが、今回in situ hybridization法で調べると好酸球前駆体以外に骨芽細胞がLD78を発現していることが分かった。中枢神経系でのLD78の役割は不明であるが、今回の結果から骨芽細胞が分泌するLD78が破骨細胞の分化を調節していると考えられ、LD78が骨代謝にも深く関与していることが分かった。

[CC趋化因子基因簇]从Ceph Mega-Yac库中鉴定出大约30个包含人CC趋化因子基因簇的克隆，并创建了一个重叠群。该簇被认为跨越了几个MB，并且揭示了八个CC趋化因子基因的染色体17 Q11上的序列顺序。此外，发现CC趋化因子基因簇是LD78α，LD78β，AT744.1，AT744.2和Rantes组，以及I-309，MCP-1和MCP-3组，跨趋化因子没有发现的地区。该重叠群还包含D17S933，并被神经纤维瘤病基因NF1和乳腺癌基因BRCA1包围。然后使用三个孤立的YAC克隆试图克隆与它们杂交的人脑cDNA。已经分离出已知或同源的cDNA，但未发现趋化因子cDNA。 [在人脑中检测到基于RT-PCR的CC趋化因子LD78和其他在人脑中检测到的基于RT-PCR的CC趋化因子LD78和其他人，[人类中枢神经系统中CC趋化因子LD78的组成表达]。因此，使用免疫组织化学染色方法使用抗LD78单克隆抗体检查了12个人脑切片，并且在所有样品中均被认为是神经元和星形胶质细胞染色的神经胶质细胞。此外，以前的免疫组织化学染色表明，骨髓中的嗜酸性粒细胞前体产生LD78，但是这次，当我们使用原位杂交方法对其进行研究时，我们发现成骨细胞表达LD78，除了嗜酸性粒细胞前体外，还表达了LD78。 LD78在中枢神经系统中的作用尚不清楚，但是这项研究的结果表明，成骨细胞分泌的LD78调节破骨细胞的分化，而LD78也与骨代谢深度涉及。