Stromal cell-derived factor1 expression on periodontal ligament cells derived from Down syndrom

唐氏综合症牙周膜细胞上基质细胞衍生因子1的表达

• 批准号: 20K10235
• 负责人: 浅川 剛吉
• 金额: $ 2.83万
• 依托单位: Showa University
• 依托单位国家: 日本
• 项目类别: Grant-in-Aid for Scientific Research (C)
• 财政年份: 2020
• 资助国家: 日本
• 起止时间: 2020-04-01 至 2024-03-31
• 项目状态: 已结题
• 来源: https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-20K10235/
• 关键词: Down症候群; 歯根膜由来細胞; SDF-1; カルシニューリン経路; マイクロアレイ解析; SV40; hTERT; カルシニュー林経路; マイクロアレイ; STR解析; 核型解析; Periodontal cell; Down's syndrome; DSCR-1; SV40-Ag; Down syndrome; PDL; SDF1; DSCR1

本研究は自己治癒能力を高めることによる歯周組織再生医療技術を確立することを目的として、歯周疾患を特徴とするDown症候群患者と健常者の永久歯歯根膜由来細胞の比較解析を行う。無菌的に分離培養した、健常者永久歯歯根膜細胞（pPDL）とDown症候群永久歯歯根膜由来細胞それぞれに (SV40) および (hTERT) の発現ベクターを導入後,G418選択培地にて培養、single cell cloningし、 株化永久歯歯根膜由来細胞(STPDL)と株化Down症永久歯歯根膜由来細胞(STPDLDS)を獲得した。獲得した細胞についてSTR解析を行い、オリジナルの細胞起源であることを確認した。STPDLとSTPDLDSは共にSV40 positive hTERT発現の上昇を確認した。また、population doubling levelも80を超えて確認した。SDF-1発現解析の結果、FGF-2を投与後、永久歯歯根膜細胞において24,48時間後には有意にSDF-1αの発現が抑制された。また、Down症歯根膜細胞ではFGF-2の影響を認めなかった。pPDLとDown症候群永久歯歯根膜歯細胞のマイクロアレイ比較解析より、Down症候群永久歯歯根膜歯細胞においてRCAN1の発現の上昇を確認した。本研究結果より獲得したSTPDLDS においてSV40 Positive, hTERTの有意な活性の上昇,Hayflicklimitを超える細胞増殖を認めた。しかし、核型解析より、染色体の倍加を認めた。Down症候群は乳歯から永久歯への交換期遅延など、様々な歯科的特徴を認める。また、進行性の歯周炎は早期に歯を損失してしまう最大の要因ともなっている。21番染色体上にあるDSCR1の活性が亢進すると、血管形成に関するカルシニューリンシグナル経路を阻害することで血管新生を抑制する。これらの歯周炎への影響についての解析を遂行していく。

在本研究中，我们将对以牙周病为特征的唐氏综合症患者恒牙牙周膜来源的细胞与健康人进行比较分析，旨在通过提高自身水平建立牙周组织再生医疗技术。 -治愈能力。将(SV40)和(hTERT)表达载体导入健康恒牙牙周膜细胞(pPDL)和唐氏综合症恒牙牙周膜衍生细胞，无菌分离培养后，在G418选择培养基中培养，单细胞培养。我们获得了恒牙牙周膜来源的细胞系（STPDL）和唐氏综合症恒牙牙周膜来源的细胞系（STPDLDS）。我们对获得的细胞进行了STR分析，确认它们是原始细胞来源。 STPDL 和 STPDLDS 均证实 SV40 阳性 hTERT 表达增加。人口倍增水平也被证实超过80。 SDF-1表达分析的结果显示，在施用FGF-2后24小时和48小时，恒牙的牙周膜细胞中SDF-1α的表达显着受到抑制。此外，在患有唐氏病的牙周膜细胞中没有观察到 FGF-2 的作用。 pPDL 和唐氏综合症恒牙牙周膜细胞的比较微阵列分析证实，唐氏综合症恒牙牙周膜细胞中 RCAN1 的表达增加。在本研究获得的 STPDLDS 中，我们观察到 SV40 阳性，hTERT 活性显着增加，细胞增殖超过 Hayflick 极限。然而，核型分析显示染色体加倍了。唐氏综合症具有多种牙齿特征，包括乳牙更换恒牙的延迟。此外，侵袭性牙周炎是早期牙齿脱落的最大原因。当位于 21 号染色体上的 DSCR1 活性增加时，它会通过抑制参与血管生成的钙调磷酸酶信号通路来抑制血管生成。我们将继续分析这些对牙周炎的影响。

项目成果

不死化ダウン症候群永久歯歯根膜由来細胞のSTR解析

永生化唐氏综合症恒牙牙周膜来源细胞的STR分析

• 发表时间: 2022
• 作者: Tanaka Satoshi;Karibe Hiroyuki;Kato Yuichi;Komatsuzaki Akira;Sekimoto Tsuneo;Shimomura-Kuroki Junko;紀田優和子,浅川剛吉,伏見直子,池田理沙,高橋万莉,新田雅一,上條竜太郎,船津敬弘.
• 通讯作者: 紀田優和子,浅川剛吉,伏見直子,池田理沙,高橋万莉,新田雅一,上條竜太郎,船津敬弘.

SV40T-Ag およびhTERT遺伝子導入による 不死化ダウン症候群歯根膜由来細胞の樹立

通过导入SV40T-Ag和hTERT基因建立永生化唐氏综合症牙周膜来源细胞

• 发表时间: 2021
• 作者: 浅川剛吉,山田篤,吉村健太郎,笹清人,木下三博,紀田優和子;上條竜太郎,船津敬弘.
• 通讯作者: 上條竜太郎,船津敬弘.