アルコ-ル脱水素酵素は酢酸発酵中にアポ化する

乙醇脱氢酶在乙酸发酵过程中被解聚

基本信息

批准号：
01560126
负责人：
松下一信
金额：
$ 0.9万
依托单位：
Yamaguchi University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1989
资助国家：
日本
起止时间：
1989 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/grant/KAKENHI-PROJECT-01560126/
关键词：
酢酸菌アルコ-ル脱水素酵素 PQQ アポ型(ホロ型)

项目摘要

1.アルコ-ル脱水素酵素(ADH)のアポ化の機構に関して(1)Gluconobacter属酢酸菌はその成育後期にADHが一部その補酵素であるPQQを遊離してアポ化する。種々の培養条件でこの現象を検討したところ、培地中のpHの低下にともなってアポ型ADHが形成されることが示された。(2)菌体およびその細胞膜をpH4以下のBufferでインキュベ-トすることによって時間とともにADHのアポ化が進行することが示された。(3)アポ型ADHのPQQによるホロ化にはカルシウムイオンの存在が必須であり、、pH6付近で最も効率良くホロ化が起こることが示された。この時のPQQの結合のKm値は122nMであることも明らかとなった。(4)アポ型ADHはホロ型ADHと異なり、細胞膜からトリトンで可溶化されずコ-ル酸によって良く可溶化されることから、その構造がPQQの脱落によって大きく変化することが示唆された。2.ADHの構造と機能に関して(1)ADHはαβγのサブユニット構造を有し、そのαサブユニットにはPQQとヘムc各1分子が結合しており、βサブユニットには2分子のヘムcが結合していることが既に知られている。この構造と機能との関係を調べる目的で、αβγ構造の解体再構成を試みた。(2)ADHをpH5条件でイオン交換クロマトグラフィ-を行うことによって、αγ成分とβ成分とに解離することができた。(3)このαγ成分は著しくADH活性を低下させており、β成分は全くその活性を欠いていたが、両者を等量で再構成することによって本来の活性を回復することが示された。

1。关于醇脱氢酶（ADH）（1）在其生长的晚期中的机理，葡萄糖杆菌属的乙酸细菌属于ADH，PQQ，这是其辅酶。在各种培养条件下研究了这一现象，结果表明，随着培养基中的pH降低，Apo-type ADH形成。（2）表明，ADH叠态化通过将细菌及其细胞膜与pH 4或更低的缓冲液一起孵育，随着时间的流逝而发展。（3）钙离子的存在对于通过PQQ的apo-type ADH浮动是必不可少的，并且已经表明，浮动在pH 6附近最有效地发生。还表明，此时PQQ结合的KM值为122nm。（4）与Holo-Type ADH不同，Triton不会从细胞膜中溶解Apo-Type ADH，而是通过胆汁酸溶解，这表明其结构由于PQQ的损失而大大变化。 2。关于ADH（1）ADH的结构和功能，ADH具有αβγ的亚基结构，众所周知，一个PQQ和血红素C的一个分子与α亚基结合，并且两个血红素C的分子与β亚基结合。为了研究这种结构和功能之间的关系，我们试图拆除和重建αβγ结构。（2）通过在pH 5条件下对ADH进行离子交换色谱法，可以将其分解为αγ和β成分。（3）该αγ成分显着降低了ADH活性，尽管β成分根本缺乏其活性，但表明将两者重新构成同等量恢复了原始活性。