グルコースー6-リン酸脱水素酵素異常症の遺伝子レベルでの病因解析

6-磷酸葡萄糖脱氢酶障碍的基因水平病因分析

基本信息

批准号：
62571019
负责人：
藤井寿一
金额：
$ 1.28万
依托单位：
Tokyo Women's Medical University
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for General Scientific Research (C)
财政年份：
1987
资助国家：
日本
起止时间：
1987 至无数据
项目状态：
已结题

项目摘要

グルコースー6-リン酸脱水素酵素(G6PD)異常症は世界で1億人以上が本症の異常遺伝子を持つと考えられ, 最も頻度の高い代謝異常症である. われわれはわが国において90家系のG6PD異常症を発見してきた. 病因は患者酵素の酵素学的, 生化学的性状より変異酵素の産生によることが最も考えられるが, その詳細は不明である. 正常酵素に関しては昨年度, 米国吉田昭博士らにより相補的DNA(cDNA)のクローニングおよび塩基配列の決定がなされた. われわれはこのcDNAの供与を受けたので, これをプローブとしてG6PD異常症の遺伝子レベルでの病因解明を試みた. 方法はG6PD異常症患者のリンパ球を株化し, そのメッセンジャーRNA(mRNA)をcDNAクローニングの材料に用いてmRNAの全構造を解析する方法をとった. この方法により, われわれは佐賀医大向井博士らと共同でアルドラーゼ(ALD)異常による遺伝性溶血性貧血の遺伝子レベルでの異常を解明した. すなわち, AUGから386番目に一塩基の置換(A→G)がみられた. その結果, 128番目のアスパラキン酸(GAU)がグリシン(GGU)へのアミノ酸置換が起っていることが判明した. さらに, 酵素活性や熱安定性にこの変異が直接かかわっていることを, 大腸菌発現系のベクターを用いて明らかにした. G6PD異常症に関しては, わが国における頻度が約0.1%と考えられるG6PD Ubeと, 特異な基質親和性を示すG6PD Kobeのリンパ芽球を大量培養し, ポリARNAを調製し, λgt10をベクターとしてcDNAライブラリーを作製した. このライブラリーのスクリーニングを行っているが, 現在迄に陽性クローンは得られていない. G6PDはALDc比較するとmRNA含量が少ない事が原因と考えられるが, 現在引き続いてスクリーニングを繰り返している.

葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）异常被认为全世界有超过1亿人患有这种疾病的异常基因，并且是最常见的代谢障碍。我们在日本发现了日本的G6PD异常。发病机理最有可能是由于患者酶的酶促和生化特性基于突变酶的产生，但细节尚不清楚。关于正常酶，去年确定了Yoshida Akira博士和其他互补DNA（cDNA）的克隆和测序。由于我们接受了cDNA捐赠，因此我们将其用作探针来阐明基因水平上G6PD异常的发病机理。该方法是将G6PD异常患者的淋巴细胞过滤，并将Messenger RNA（mRNA）用作cDNA克隆材料来分析mRNA的整个结构。该方法与Mukai博士和Saga医科大学以及其他人合作使用，以阐明由aldolase（ALD）异常引起的遗传性溶血性贫血的遗传异常。换句话说，在8月的第386位位置发现了单个基础替代（A→G）。结果，发现在128位的天冬酸酯（GAU）在甘氨酸（GGU）中具有氨基酸取代。此外，揭示了这种突变与使用大肠杆菌表达的载体直接与酶活性和热稳定性有关。关于G6PD异常，G6PD UBE在日本被认为约为0.1％，而G6PD具有独特的底物亲和力。大量培养了科比淋巴细胞制备多果娜，并使用λgt10作为载体制备cDNA文库。尽管筛选了该库，但迄今为止尚未获得积极的克隆。 G6PD被认为是由于其与ALDC相比其mRNA含量低，但目前正在筛查。