アラビドプシス変異株を用いた左右性決定機構の解明

利用拟南芥突变体阐明左右决定机制

基本信息

批准号：
15031219
负责人：
橋本隆
金额：
$ 3.58万
依托单位：
Nara Institute of Science and Technology
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至 2004
项目状态：
已结题

项目摘要

1.SPR2-GFPをCaMV35Sプロモーターを用いて植物体で強制発現させると、GFP蛍光は表層微小管に局在し、一部は微小管上に数珠状に連なったドットとして観測された。通常の野生型細胞ではSPR2の発現レベルは低いので、野生型レベルで発現させた場合の細胞内局在性を調べた。SPR2ゲノム領域に2分子のGFPをタンデムに挿入し、形質転換植物体を作製したところ、GFP蛍光が微小管上に数珠状に連なって観察された。2.微小管重合阻害剤プロピザミドに対する感受性が野生型と異なる変異株をスクリーニングすることにより、これまでに多数のチューブリン変異株を得た。これらの変異株は右または左巻きねじれを示す半優性変異であり、αまたはβチューブリンのアミノ酸置換変異であった。根伸長領域の表皮細胞において、細胞の伸長(ねじれ)方向と表層微小管束の配向の間の相関を調べたところ、左巻き方向にねじれる変異株はすべて右巻きの表層微小管束をもっており、反対に右巻き変異株はすべて左巻き微小管束を示した。すなわち、微小管束の直角方向に細胞が伸長した。3.新規の右巻き変異株spiral3を単離し、その原因遺伝子を同定したところ、γチューブリン環状複合体γTuRCの構成成分Grip84のアミノ酸置換変異であった。γTuRCは真核生物で保存された微小管重合核形成中心であり、植物の間期細胞では細胞膜内側に局在すると考えられている。酵母2ハイブリッド解析により、変異型Grip84ではGrip91との相互作用が弱くなっていた。spr3変異株ではγTuRCの安定性と重合核機能が損なわれたため、表層微小管の動態が変化したと想像される。4.GFPをβチューブリンのN末端に融合したGFP-TUBを強制発現させた植物体を用いて、in vivoにおける表層微小管の動態をスピンディスク型共焦点レーザー顕微鏡を用いて観察する方法を確立した。

1。当Spr2-GFP使用CAMV35S启动子被迫在植物中表达时，将GFP荧光定位在表面微管上，其中一些被视为在微管上以玫瑰色形状连接的点。由于正常的野生型细胞的SPR2表达水平较低，因此我们在野生型水平表达时研究了亚细胞定位。当将两个GFP分子插入串联的SPR2基因组区域以制备转化的植物时，在微管上以玫瑰经的方式观察到GFP荧光。 2。到目前为止，通过筛选突变体从野生型到微管聚合抑制剂丙酰胺不同，已经获得了许多微管蛋白突变体。这些突变体是显示右或左手扭转的半主导突变，是α或β微管蛋白的氨基酸取代突变。在根部伸长区域的表皮细胞中，研究了细胞延伸方向（扭曲）和表面微管方向之间的相关性。左手方向扭曲的所有突变体均具有右手表面微管，而右手突变体均表现出左手的微管。也就是说，细胞沿微管的垂直方向拉长。 3。当分离出新型的右手突变体螺旋并鉴定出致病基因时，它是Grip84中的氨基酸取代突变，Grip84是γ-微管蛋白圆形复合物γTURC的成分。 γTURC是一个微管聚合成核中心，在真核生物中保守，被认为位于植物相间细胞中的细胞膜内。酵母2-杂交分析表明，突变体Grip84与Grip91的相互作用较弱。可以想象，由于γTURC的稳定性和SPR3菌株的聚合核功能的损害，表面微管的动力学已被改变。 4。建立了一种方法，可以使用旋转盘型共聚焦激光显微镜在体内观察表面微管的动力学，其中使用该植物被迫GFP-TUB被迫表达GFP-tub，其中GFP将GFP融合到β-微管蛋白的N-末端。

项目成果

期刊论文数量（20）

专著数量（0）

科研奖励数量（0）

会议论文数量（0）

专利数量（0）

Microtubule defects and cell morphogenesis in the lefty1lefty2 tubulin mutant of Arabidopsis thaliana

DOI：
10.1093/pcp/pch026
发表时间：
2004-02-01
期刊：
PLANT AND CELL PHYSIOLOGY
影响因子：
4.9
作者：
Abe, T;Thitamadee, S;Hashimoto, T
通讯作者：
Hashimoto, T

F.Kumagai: "γ-Tubulin distribution during cortical microtubule reorganization at the M/G1 interface in tobacco BY-2 cells."Eur.J.Cell Biol.. 82. 43-51 (2003)

F. Kumagai：“烟草 BY-2 细胞 M/G1 界面处皮质微管重组期间的 γ-微管蛋白分布。”Eur.J.Cell Biol.. 82. 43-51 (2003)

DOI：
发表时间：
期刊：
影响因子：
0
作者：
通讯作者：

Plant-specific microtubule-associated protein SPIRAL2 is required for anisotropic growth in arabidopsis

DOI：
10.1104/pp.104.051748
发表时间：
2004-12-01
期刊：
PLANT PHYSIOLOGY
影响因子：
7.4
作者：
Shoji, T;Narita, NN;Hashimoto, T
通讯作者：
Hashimoto, T

SPIRAL1 encodes a plant-specific microtubule-localized protein required for directional control of rapidly expanding Arabidopsis cells

DOI：
10.1105/tpc.017830
发表时间：
2004-05-01
期刊：
PLANT CELL
影响因子：
11.6
作者：
Nakajima, K;Furutani, I;Hashimoto, T
通讯作者：
Hashimoto, T

A semidominant mutation in an Arabidopsis mitogen-activated protein kinase phosphatase-like gene compromises cortical microtubule organization

DOI：
10.1105/tpc.021865
发表时间：
2004-07-01
期刊：
PLANT CELL
影响因子：
11.6
作者：
Naoi, K;Hashimoto, T
通讯作者：
Hashimoto, T

DOI：
{{ item.doi }}
发表时间：
{{ item.publish_year }}
期刊：
{{ item.journal_name }}
影响因子：
{{ item.factor }}
作者：
{{ item.authors }}
通讯作者：
{{ item.author }}

数据更新时间：{{ journalArticles.updateTime }}

作者：
{{ item.author }}

数据更新时间：{{ monograph.updateTime }}

作者：
{{ item.author }}

数据更新时间：{{ sciAawards.updateTime }}

作者：
{{ item.author }}

数据更新时间：{{ conferencePapers.updateTime }}

作者：
{{ item.author }}

数据更新时间：{{ patent.updateTime }}

橋本隆其他文献

A Case of Refractory Paraneoplastic Pemphigus

难治性副肿瘤性天疱疮一例

DOI：
10.2336/nishinihonhifu.80.436
发表时间：
2018
期刊：
Nishi Nihon Hifuka
影响因子：
0
作者：
江原大輔;小池雄太;大久保佑美;松尾真稔;石井文人;橋本隆;宇谷厚志
通讯作者：
宇谷厚志

症例下腿へのシェーバーによる物理刺激が誘因と考えられた若年成人の落葉状天疱瘡の1例

病例：一例年轻成人患落叶型天疱疮，被认为是由剃须刀对小腿的物理刺激引起的。

DOI：
10.18888/hi.0000001037
发表时间：
2018
期刊：
皮膚科の臨床
影响因子：
0
作者：
濱端明海;天野博雄;赤坂俊英;橋本隆;石井文人
通讯作者：
石井文人

先天性表皮水疱症、皮膚疾患最新の治療2005-2006

先天性大疱性表皮松解症，皮肤病的最新治疗方法2005-2006

DOI：
发表时间：
2005
期刊：
影响因子：
0
作者：
Kouno M;Kondoh G;Horie K;Komazawa N;Ishii N;Takahashi Y;Takeda J;Hashimoto;玉置邦彦;乾重樹;S.Ikejima;橋本隆
通讯作者：
橋本隆

自己免疫性水疱症の全身療法、皮膚科のコツと落とし穴

自身免疫性大疱病的全身治疗、皮肤病学技巧和陷阱

DOI：
发表时间：
2006
期刊：
影响因子：
0
作者：
Yamane N;Hashimoto T;et. al.;Yoshida M et al.;Yamada T et al.;Battori N et al.;Mayuzumi M et al.;Yoshida M et al.;Washio H et al.;Wakahara M et al.;Takahashi Y et al.;Dainichi T et al.;Shinojima Y et al.;Osawa M et al.;Hashimoto T;橋本隆;橋本隆
通讯作者：
橋本隆