血液からのペプチド性腫瘍マーカー探索法の確立

血液中肽类肿瘤标志物检测方法的建立

基本信息

批准号：
15025275
负责人：
佐々木一樹
金额：
$ 1.92万
依托单位：
National Cancer Center Research Institute and Research Center for Innovative Oncology, National Cancer Center Hospital East
依托单位国家：
日本
项目类别：
Grant-in-Aid for Scientific Research on Priority Areas
财政年份：
2003
资助国家：
日本
起止时间：
2003 至无数据
项目状态：
已结题

来源：
https://kaken.nii.ac.jp/en/grant/KAKENHI-PROJECT-15025275/
关键词：
ペプチド質量分析腫瘍マーカー

项目摘要

網羅的な分析手法を利用して、がんの診療に役立つ低分子量蛋白質・ペプチド性腫瘍マーカーを血液から同定可能であれば非常に有望であるが、実際は方法論が確立されていない。本研究では、その前段階として、血液からのペプチド検出法の確立を目標とした。血液からのペプチド成分の抽出は、種々の生化学的方法を用い、検出はマトリックス支援レーザー脱離型およびエレクトロスプレー型の2種類のイオン化法による質量分析によった。本年度は以下の点を明らかにした。1)臨床で一般に採取されている血清は、探索材料としては不適当である。理由として、採血後に活性化されているプロテアーゼの影響を抑止できないこと、および凝固過程で多量のフィブリノペプチドが生成することがあげられる。2)血漿はプロテアーゼ阻害剤・抗凝固剤添加条件で一定の条件で採取された検体が使用可能である。3)2)で通常の採血レベルで空腹時に採取された新鮮血漿から再現性よくペプチドを質量分析で検出可能とする方法を確立した。4)血漿1mLから同定されるペプチドは、存在量の多い血漿蛋白質由来の断片ペプチドであった。これらの血中濃度は数nmol/mlに達している。5)抗凝固剤の存在下でも採血時の侵襲で活性化したと考えられるフィブリノペプチドの生成が明瞭に観察された。なお、疾患特有の存在を示す蛋白質・ペプチドの存在量は10fmol-1pmol/mlのオーダーであり、現在の質量分析の感度を考慮すると、数百mlの血漿から探索することが妥当であると見積もられた。

如果可以使用全面的分析技术来鉴定有助于癌症治疗的低分子量蛋白质肿瘤标志物，那将是非常有希望的，但实际上，尚未建立方法。这项研究的目的是建立一种检测血液中肽作为初步步骤的方法。使用多种生化方法从血液中提取肽成分，并使用两种类型的电离方法通过质谱法进行检测：基质辅助激光解吸和电涂料。今年，揭示了以下几点：1）通常在临床实践中收集的血清作为搜索材料是不合适的。原因包括无法抑制血液收集后激活的蛋白酶的影响，以及在凝血过程中产生大量纤维蛋白肽的作用。 2）在添加蛋白酶抑制剂和抗凝剂的条件下，在某些条件下收集的样品可用于血浆。 3）在2）中，已经建立了一种方法，可以通过从正常血液收集水平下在禁食水平上收集的新鲜等离子体的质谱检测肽。 4）从1 ml血浆鉴定的肽是源自高丰度血浆蛋白的片段肽。这些血液水平已达到几个NMOL/mL。 5）即使在存在抗凝剂的情况下，也清楚地观察到了纤维蛋白肽的产生，被认为在血液收集过程中被侵入性激活。此外，表现出疾病特异性存在的蛋白质和肽的丰度为10 fmol-1 pmol/ml，并且考虑到当前质谱的敏感性，估计从几百mL血浆中进行搜索是合理的。